目的:探讨通过慢病毒转染的技术手段导入外源Periostin基因来构建重组慢病毒LV5-PERI过表达Periostin基因体系,并检测转染的效率;通过对比分析检测的结果来明确过表达Periostin基因对体外培养的小鼠血管内皮前体细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移等功能方面的影响和差异;为后期设想通过基因转染的方法构建血管内皮前体细胞过表达Periostin体系,从而增强血管内皮前体细胞的生物学功能,使得血管内皮前体细胞能够早期、迅速的归巢至血管壁受损伤的部位,并促进前体细胞更好的向成熟的血管内皮细胞分化,从而为防治血管闭塞性疾病治疗术后出现的管腔再狭窄、血栓形成提供治疗思路和理论依据。方法:针对目的基因(Periostin基因),采用慢病毒转染的方法将外源基因构建到LV5载体上,形成重组慢病毒LV5-PERI,然后侵染靶细胞(血管内皮前体细胞)建立一套稳定的LV5-PERI过表达Periostin基因体系,保证细胞侵染效率达到90%以上;设置三组血管内皮前体细胞,即:质粒转染组(过表达组)、空质粒转染组、空白对照组,分别采用Western blotting,RT-PCR,Elisa等检测手段来明确转染的效率。采用CCK8法分别在24h、48h、72h、96h,120h时间点检测490nm处吸光值,并绘制生长曲线,比较三组细胞在增值活性方面的差异;采用Accuri C6个人型流式细胞仪检测三组细胞凋亡情况。检测细胞迁移功能的实验(本实验采用划痕法),分别在0h、12h、24h时间点检测,观察比较各组细胞在迁移能力方面有无差异;利用Transwell小室方法检测过表达Periostin基因对血管内皮前体细胞侵袭功能的影响。进行统计学方法比较三组细胞实验结果数据,分析过表达Periostin与血管内皮前体细胞增殖活性、凋亡、侵袭及迁移等方面功能影响的相关性。结果:LV5-PERI重组质粒构建成功,Periostin基因稳定转染组血管内皮前体细胞periostin蛋白相对表达量明显增高,通过Elisa法检测在450nm处吸光值约为相应空载体稳定转染组和空白对照组的18倍,差异有统计学意义(P<0.05)。在细胞增殖能力方面,通过CCK8法检测过表达组较空白对照组间吸光值小,增殖活性低,差异具有统计学意义(P<0.05);对细胞凋亡方面的检测发现,过表达转染组比空白对照组细胞凋亡数目多,组间比较表现出明显的差异性(P<0.05);在细胞迁移能力方面,本实验通过划痕法检测过表达转染组细胞均比空白对照组迁移百分比快(P<0.05);同一重复实验中过表达转染组细胞侵袭数目均比空白对照组多,组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。而在细胞各项功能的检测中(增值、凋亡、迁移、侵袭),质粒表达组与空白对照组间均未表现出明显差异性(P>0.05)。结论:通过慢病毒的方法转染LV5-PERI重组质粒能够稳定、高效的构建血管内皮前体细胞过表达Periostin基因体系,并可以在体外持续过表达periostin蛋白。Periostin可以增强细胞的活性,通过高表达periostin蛋白影响细胞的生物学行为,该蛋白在增强血管内皮前体细胞的迁移和侵袭能力方面起到一定的促进作用。而单纯上调periostin对血管内皮前体细胞的增殖无明显影响。