UC患者粪便上清液miRNA表达与中医证候的相关性研究

来源 :陕西中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tonybenben
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目的:UC(ulcerative colitis,溃疡性结肠炎)的发病机制与肠道菌群失调密切相关,众多文献显示肠道菌群可通过调节机体miRNA的特异性表达间接导致UC的发生。本实验通过对UC患者湿热内蕴证、脾胃气虚证、脾虚湿热证三种不同中医证候患者粪便上清液miRNA的表达、相关性分析以及新miRNA预测等研究,阐明UC患者不同中医证候之间粪便上清液miRNA的差异性表达,再通过比较三种不同的中医证候miRNA的表达结果,进行靶基因预测,发现具有诊断意义的miRNA生物学标志,探索中医证候与miRNA的特异性表达是否存在相关性与差异性。  方法:以UC患者和健康志愿者做为本次受试研究对象。根据UC中医证候的诊断标准,将本次UC受试者分为湿热内蕴组、脾胃气虚组和脾虚湿热组,并建立纳入标准和排除标准。本次研究先确定UC中医证型,根据标准筛选条件,选择实验组患者,收集健康人及患者的粪便标本。提取粪便Total RNA后合成cDNA,使用RT-PCR技术检测miR-29a-3p及miR-195-5p的表达水平。使用MiSeq高通量测序技术对粪便上清液miRNA进行高通量测序、生物信息学分析及靶基因预测等;以此研究UC不同中医证候与健康人粪便上清液miRNA表达的相关性和差异性。  结果:(1)所有待测样本共发现已知miRNA前体及成熟体分别为495个和525个,预测到新(novel)miRNA及其前体均为64个。(2)差异化分析发现疾病组(JB)和健康组(JK)相比,miRNA差异化表达为33条,其中上调为24个,下调为9个;其中脾虚湿热组(PS)和健康组(JK)相比,miRNA差异化表达为21个,其中上调为15个,下调为6个;脾虚湿热组(PS)和脾胃气虚组(QX)相比,miRNA差异化表达为5个,其中上调为3个,下调为2个;湿热内蕴组(SR)和健康组(JK)相比,miRNA差异化表达为29个,其中上调为23个,下调为6个;湿热内蕴组(SR)和脾胃气虚组(QX)相比,miRNA差异化表达为16个,其中上调为11个,下调为5个;脾虚湿热组(PS)和湿热内蕴组(SR)相比,miRNA差异化表达为1个,其中上调为0个,下调为1个;脾胃气虚组(QX)和健康组(JK)相比,miRNA差异化表达为17个,其中上调为5个,下调为12个。  (3)相关性分析显示共同表达于疾病组(JB)和健康组(JK)的miRNA为33条;共同表达于脾胃气虚组(QX)和健康组(JK)的miRNA为17条;共同表达于脾虚湿热组(PS)健康组(JK)的miRNA为21条;共同表达于湿热内蕴组(SR)和健康组(JK)的miRNA为29条,在对所有UC患者疾病组(JB)的miRNA表达相关性的分析中发现,共同表达于脾虚湿热组(PS)和脾胃气虚组(QX)的miRNA为5条;共同表达于湿热内蕴组(SR)和脾胃气虚组(QX)的miRNA为16条;共同表达于脾虚湿热组(PS)和湿热内蕴组(SR)的miRNA为1条。(4)新(novel)miRNA预测分析发现,novel-105特异性表达于脾胃气虚组(QX);novel-115特异性表达于脾虚湿热组(PS)和健康组(JK);novel-119特异性表达于脾胃气虚组(QX)和湿热内蕴组(SR);novel-120特异性表达于脾虚湿热组(PS),提示novel-105和novel-120可能分别是UC脾胃气虚组(QX)和脾虚湿热组(PS)的特异性标志。(5)RT-PCR实验结果显示健康组(JK)和脾虚湿热组(PS),健康组(JK)和脾胃气虚组(QX),脾虚湿热组(PS)和脾胃气虚组(QX)中,miR-29a-3p表达均存在显著差异。  结论:(1)通过比较不同UC中医证候患者粪便上清液miRNA的表达情况,证实中医证候与miRNA的特异性表达密切相关,不同的中医证候miRNA的表达明显存在差异。(2)通过RT-PCR实验,证实高通量测序的结果,说明其具有一定的可靠性。(3)novel-105可能是脾胃气虚证的特异性标志,novel-120可能是脾虚湿热证的特异性标志。(4)溃疡性结肠炎患者粪便上清液中miRNA可能通过多条途经参与UC疾病的发生、发展及愈后的全过程。
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