猪链球菌(Streptococcus suis,SS)能引起包括人和猪在内的多种疾病,是一种重要的人兽共患病病原菌,严重危害公共安全卫生。根据荚膜多糖抗原性的差异,将猪链球菌分为35个血清型,其中猪链球菌2型(SS2)分布最广且毒力最强。SS引起的猪链球菌病在世界范围内均有分布,近年来,SS2引起的病症在我国爆发了2次,造成人员伤亡和巨大的经济损失。目前SS2受到世界范围内的广泛关注,陆续报到了多种该菌的毒力因子,但其致病机理仍不清楚。本研究通过比较基因组学的方法,比较强毒株ZY05719和弱毒株T15的差异基因,找出ZY05719中有而T15中无的基因,这些差异基因可能与强毒株的毒力相关。从中筛选出Dbp基因并以此为研究对象,通过构建缺失突变株以及比较生物学特性,对Dbp在SS2致病过程中所起的作用进行研究,丰富了对该菌致病机理的认识。1猪链球菌2型强毒株ZY05719和弱毒株T15的基因组比较分析及Dbp基因在猪链球菌中的分布本实验用比较基因组学的方法,通过mauve软件比较弱毒株T15和强毒株ZY05719的差异基因,筛选出ZY05719中有而T15中无的基因,一共92个基因片段,这些差异基因可能与强毒株的毒力相关。然后通过生物信息学分析等手段筛选出目的基因Dbp.Dbp的ORF的碱基数目为537bp,编码178个氨基酸,含有2段跨膜结构,与XRE转录因子超家族结构高度同源。通过聚合酶链式反应(PCR)方法检测95株不同地区、年代SS中的Dbp基因。结果显示：Dbp基因存在于大多数SS2中,阳性率为88%,而在SS其它血清型中分布较少,阳性率为17.8%,说明Dbp基因为SS2中相对保守基因。2猪链球菌2型Dbp基因缺失株的构建以猪链球菌2型ZY05719为模板,分别扩增Dbp基因的上下游同源臂,分别为667bp和668bp,然后以此为模板扩增长度为1335bp的片段ad。将ad与自杀性质粒pSET4S连接,将连接产物转化入DH5α感受态中,构建了基因缺失载体ad-pSET4S.然后将构建的载体ad-pSET4S电转化入ZY05719的感受态细胞中,利用壮观抗性进行初步的筛选,并用PCR和测序进行鉴定,结果显示成功构建了基因突变株△Dbp,为进一步研究Dbp功能奠定了基础。3猪链球菌2型Dbp基因缺失株的生物学特性及致病性分析对构建好的缺失株△Dbp与亲本株SS2的zY05719的生物学特性及致病性进行了比较研究。结果表明,缺失株△Dbp与亲俐目比,生长特性在对数期有差异,菌体形态无明显的变化,但荚膜特性略有区别；对斑马鱼致病性试验表明,△Dbp(LD50=3.25×106)显著低于野毒株(LD50=5.97×10。)。说明Dbp在SS2致病性方面发挥作用。4 Dbp基因的克隆表达及其免疫反应性分析脚是利用比较基因组学筛选出来的猪链球菌2型(SS2)毒力相关因子。根据Dbp的基因序列,进行大肠杆菌偏好的密码子优化,然后全基因合成优化后的Dbp基因并定向克隆至表达载体PET32a(+),成功构建了重组质粒。将Dbp-PET32a(+)的重组质粒转化入表达宿主BL21中,诱导表达蛋白。表达蛋白转印到PVDF膜上,与兔的高免血清反应。重组蛋白的免疫转印结果表明,Dbp具有良好的免疫原性。