本研究以GTPV基因组为模板,以N1L基因侧翼序列为同源重组左右臂构建了表达绿色荧光蛋白及黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶的转移载体质粒pLR-EGFP-gpt。将pLR-EGFP-gpt与GTPV共转染Vero细胞(非洲绿猴肾细胞)并在细胞内发生同源重组,通过加压筛选纯化出缺失N1L基因的重组病毒GTPV△N1L。采用相同方法在pLR-EGFP-gpt中反向插入N1L基因表达盒构建了N1基因缺失后再拯救的重组转移载体pLR-EGFP-gpt-N1Lrev,并与GTPV共转染后筛选出恢复突变的重组病毒GTPV N1Lrev。遗传稳定性和生物学特性鉴定证实,GTPV △ N1L能在至少10代内稳定遗传,且在细胞病变和生长性能等方面与亲本毒株相比均未发生显著改变,但是相同毒价的GTPV △ N1L与亲本毒株在病毒拷贝数上相差30倍,初步证实缺失N1L基因并没有对病毒在培养细胞中复制产生太大影响,但是使病毒毒力有一定程度的降低,表明N1L可能为病毒毒力因子之一。扩增GTPV N1L全长基因,构建了N1L基因的真核表达质粒pcDNA-N1L并转染Hela细胞,经G418加压筛选,采用RT-PCR和Western-blotting分析鉴定,成功获得了3株稳定表达N1L基因的Hela多克隆细胞株。本研究为深入探讨N1蛋白的生物学活性及在GTPV致病过程中的作用,阐明GTPV的发病机理奠定基础。