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副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus,Vp)是一种革兰氏阴性菌,广泛存在于各种水环境中,如海洋,沿海和淡水环境。副溶血弧菌也是一种重要食源性病原菌,不仅能够导致海洋动物弧菌病,人们食用生的或者未煮熟的水产品可以导致急性胃肠炎。不仅严重威胁人类的饮食健康,也给水产养殖业造成巨大的经济损失,目前研究发现其致病性主要与黏附因子、溶血毒素、T3SSs、T6SSs、运动性、摄铁系统和蛋白酶等毒力因子息息相关。转录调控因子(TFs)主要是通过直接结合到启动子区域,直接调控下游基因的表达,如代谢途径、群体感应系统、毒力系统以及运动性等多种信号通路。为了深入了解毒力基因致病机制,前期研究通过转座子插入失活的方法(TIS)筛选出230个与肠道定殖相关的基因。本研究筛选其中8个转录调控因子作为本次研究的对象,分别为VPA0041、VPA0076、VPA0240、VPA0692、VPA0806、VPA1365、VPA1562和VPA1701。利用同源重组的方法分别成功构建了这8个基因的缺失突变株,分别为△VPA0041、△VPA0076、△VPA0240、△VPA0692、△VPA0806、△VPA1365、△VPA1562和△VPA1701。幼兔灌胃实验发现△VPA1365与△VPA1701相比于WT毒力显著下降,且qRT-PCR实验结果显示△VPA1365中的T3SSs相关基因表达下调,上述结果表明VPA1365通过调控T3SSs基因的表达介导副溶血弧菌肠道定殖。运动性实验发现△VPA0041与△VPA1701的泳动能力丧失,透射电镜(TEM)观察到在固体硬板培养后△VPA0041与△VPA1 701细胞无周生鞭毛的生长。qRT-PCR和RNA-seq实验结果表明△VPA0041与△VPA1 701中侧生鞭毛基因均下调表达。此外,RNA-seq的结果也表明VPA0041与VPA1701在副溶血弧菌中是一种重要的调控因子,不仅能够调控运动性,还参与细菌的生长代谢途径、群体感应系统、ABC转运系统和双组分系统等通路全局把控细菌。为了进一步了解VPA0041与VPA1701调控运动性的分子机制,分别构建了△VPA0041与△VPA1 701的蛋白表达菌株,表达并纯化两种蛋白,凝胶迁移阻滞实验(EMSA)结果表明,VPA0041和VPA1701蛋白分别结合鞭毛基因的启动子调控鞭毛系统进而介导副溶血弧菌的运动性。副溶血弧菌作为一种重要的致病菌,严重威胁人类的身体健康。本研究主要通过构建8个转录调控因子的缺失突变株,并通过幼兔模型和运动性实验进行筛选,最终发现△VPA0041、△VPA1365和△VPA1701毒力显著下降。深入研究发现,VPA1365与VPA0041和VPA1701分别通过调控T3SSs基因与侧生鞭毛基因的表达来介导副溶血弧菌的肠道定殖。