论文部分内容阅读
目的:利用慢病毒载体介导的短发夹RNA(short hairpin RNA,shRNA)在大鼠蓝斑核下调去甲肾上腺素转运体(norepinephrine transporter,NET)的表达,探讨其对大鼠抑郁样行为的影响,为抑郁症的基因治疗提供实验依据。方法:(1)构建NET-shRNA重组慢病毒(ShRNA-1146、ShRNA-1222、ShRNA-330、ShRNA-629)及阴性对照(ShRNA-NC),感染PC12细胞后用Q-PCR检测NET mRNA水平,用Western Blot检测NET蛋白水平。(2)Wistar大鼠建立慢性不可预见性温和应激抑郁症模型(chronic unpredictable mild stress,CUMS),持续3周后在大鼠双侧蓝斑核注射NET-shRNA;用强迫游泳实验、糖水偏好实验、旷场实验评价大鼠抑郁样行为;用Western Blot检测大鼠NET水平;用高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)检测大鼠去甲肾上腺素(norepinephrine,NE)水平。结果:(1)4个干扰序列均可下调NET的mRNA和蛋白水平,其中ShRNA-1146对NET蛋白的沉默效率最高(P<0.01)。(2)与抑郁症模型组相比,蓝斑核注射NET-shRNA组大鼠在强迫游泳实验中不动时间减少(P<0.01),在糖水偏好实验中糖水偏好率增加(P<0.01),在旷场实验中得分增加(P<0.01),蓝斑核NET蛋白表达水平下降(P<0.01),NE水平升高(P<0.05)。结论:本研究构建的NET-shRNA慢病毒可在体外高效下调NET基因表达,单次注射至抑郁症模型大鼠蓝斑核可使NET基因稳定沉默,逆转大鼠NE能系统功能紊乱,显著改善抑郁样行为,为探索抑郁症的基因治疗提供了实验依据。