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红系分化相关基因EDAG (Erythroid Differentiation-Associated Gene)是一种特异表达于造血组织和细胞,对造血系统的发育及分化起重要调控作用的基因。目前对EDAG的作用机制尚缺乏深入的了解。本论文从基因调控、功能结构域、相互作用蛋白质三个方面对EDAG发挥作用的分子机制进行初步探讨。第一,EDAG调控造血细胞分化的分子机制研究。在小鼠髓系前体细胞32D细胞中过表达EDAG导致红系和巨核系表型的出现。利用小鼠全基因组芯片分析基因表达变化,发现过表达EDAG可导致32D细胞的332个基因表达下调,288个基因表达上调。其中红系／巨核系转录因子GATA-1及其靶基因EKLF、hemoglobin、NF-E2、Gfi-1b等基因的表达明显上调,而肥大细胞表面标记GP49A和单核细胞特异标记CD14等则表现为下调表达。在K562细胞中采用RNAi敲低EDAG水平,GATA-1及其靶基因NF-E2、Gfi-1b、HBB、EKLF和EPX的mRNA表达水平均显著下调。这些结果表明EDAG的高表达可促进32D细胞向红系／巨核系分化,转录因子GATA-1可能在此过程中起重要作用。第二,EDAG蛋白质功能与结构的研究。通过双荧光素酶报告基因检测,发现Gal4DBD-EDAG融合蛋白质在哺乳动物细胞中表现出转录抑制活性,但EDAG的124-184aa和384-484aa这两段区域具有较强的转录激活活性。转录抑制因子CtBP1可抑制124-184aa和384-484aa的转录激活活性。EDAG在PMA刺激的条件下,第123位和381位的丝氨酸磷酸化水平上调,但这两个磷酸化位点的突变并不影响EDAG的转录调节活性。提示EDAG同时具有转录激活和转录抑制活性,其调控基因表达的机制可能非常复杂。第三,EDAG与NPM相互作用的初步研究。通过Co-IP验证EDAG与NPM存在生理性相互作用,EDAG通过其N末端(1-124aa)与NPM的N末端(1-187aa)相互作用。在PMA诱导的K562巨核分化过程中,过表达EDAG可稳定NPM蛋白质,而下调表达EDAG则加速NPM蛋白质的下调。EDAG对NPM稳定性的影响可能参与EDAG对造血细胞分化、增殖、存活的调控过程。