细菌幽灵(BG)是一种新型的具有佐剂性质的疫苗或DNA疫苗递送系统。它是被移去了细胞质的无活性,但含有细胞形态和抗原结构特性的细菌细胞包膜。它是通过裂解基因在革兰氏阴性菌中的表达进行遗传灭活而实现的。细菌幽灵表现细胞表面的天然功能性和抗原结构。因此,将该技术应用于动物疫苗研究,对于为动物疾病感染的预防开发安全有效的新型疫苗具有十分重要的意义。我们以猪革拉瑟氏病病原菌副猪嗜血杆菌为受体菌,研究了含PhiX174 E裂解基因的重组质粒,通过克隆到位于热敏λpL/pRcI857、lacpo-lacI8启动子阻遏系统和tol表达系统控制的质粒载体。E介导裂解温控的主要通过λpR基因表达调节途径延长λpR启动子或cI857阻遏系统的热稳定性。突变的λpR启动子或操纵子区导致一个新的表达系统,即阻遏E基因在37℃表达,但允许在39～42℃范围内诱导细胞裂解。主要结果如下;1.将含有裂解基因E的质粒pHH43转化进入大肠杆菌DH5α中,诱导表达后,发现裂解基因在大肠杆菌中的裂解率最高可达到99.84%,通过扫描电镜观察在细菌的两极和细菌分裂位置形成了疏水孔道。但将pHH43转化副猪嗜血杆菌没有成功。2.将PHIX174基因E的表达盒(Cassette)克隆到pLS88穿梭质粒,构建了pLS88-E质粒。经酶切鉴定和序列测定与理论PHIX174 E基因一致。3.将重组质粒pLS88-E分别转化大肠杆菌和副猪嗜血杆菌,诱导表达,比较裂解率。结果显示两种细菌的在温敏诱导点均呈现细胞浓度下降,平板培养活细胞减少;副猪嗜血杆菌裂解率达到99.84%,大肠杆菌中的的裂解率约为82.04%。电镜观察结果显示在细菌膜上出现了细胞小孔;由此可证明,副猪嗜血杆菌幽灵制备成功。以上结果为研制有效的副猪嗜血杆菌幽灵疫苗及其他革兰氏阴性菌细菌幽灵疫苗奠定了技术基础。