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目的:放疗是非小细胞肺癌治疗的主要手段之一,放射抵抗是影响NSCLC放疗疗效的重要原因,EMT是放射抵抗产生的主要原因。研究表明肺腺癌放射抗拒细胞发生了EMT表型的改变,且miR-183在肺腺癌放射抗拒细胞株中表达增高,提示miR-183可能介导EMT并在肺腺癌细胞放射抗拒中发挥作用。因此对miR-183调控机制的深入探讨,将有望阐明其与EMT的关系及二者在肺腺癌细胞放射抵抗中的作用,为临床上寻找提高NSCLC放射治疗疗效的靶点提供新的思路。方法:倒置显微镜观察细胞形态学的改变;CCK-8细胞增殖实验比较不同细胞接受相同剂量照射后细胞生存率的差异;克隆形成实验比较细胞放射抗拒性能之间的差异;划痕愈合实验比较细胞迁移能力的改变;qPCR法检测细胞中miR-183的表达,qPCR及Western Blot分别检测ZEB1及EMT相关分子标志物mRNA及蛋白表达水平的改变;慢病毒转染实验实现对H1299及H1299R细胞中mi R-183基因的上/下调。结果:1.X射线持续照射后,肺腺癌细胞的形态发生了变化,由原本紧密连接的上皮细胞形态变成连接疏松、形态狭长并伸出伪足的类似成纤维细胞形态;在课题组前期的研究中:克隆形成实验表明,相比于H1299细胞,H1299R细胞的存活肩区更宽,放射抗拒性更强(P<0.05);CCK-8细胞增殖实验表明,相比于H1299细胞,H1299R细胞在接受亚致死剂量(6Gy)X射线照射后,表现出更高的生存率(P<0.05);qPCR检测发现,mi R-183、ZEB1、Vimentin在H1299R细胞中高表达(P<0.05),E-cadherin表达变化无差异(P>0.05);Western Blot检测发现,ZEB1、Vimentin在H1299R细胞中高表达,E-cadherin表达降低(P<0.05)。2.成功构建干扰miR-183表达的慢病毒载体,qPCR验证miR-183在H1299R-shRNA-miR183细胞中表达降低(P<0.05)。进一步克隆形成实验表明,相比于阴性对照H1299R-shRNA-NC细胞,干扰miR-183表达后的H1299R-shRNA-miR183细胞的存活肩区变窄,放射抗拒性减弱(P<0.05);CCK-8细胞增殖实验表明,相比于H1299R-shRNA-NC细胞,H1299R-shRNA-mi R183细胞在接受4Gy X射线照射后,生存率降低(P<0.05);划痕愈合实验发现,H1299R-shRNA-miR183细胞的划痕愈合时间相对延长,细胞迁移能力减弱(P<0.05);qPCR及Western Blot检测发现在基因及蛋白水平ZEB1、Vimentin在H1299R-shRNA-miR183细胞中表达均降低,E-cadherin表达均相对增高(P<0.05)。3.成功构建miR-183上调表达的慢病毒载体,qPCR验证miR-183在H1299-EGFP-miR183细胞中表达增高(P<0.05)。进一步克隆形成实验表明,相比于阴性对照H1299-EGFP-NC细胞,mi R-183上调表达后的H1299-EGFP-miR183细胞的存活肩区变宽,放射抗拒性增强(P<0.05);CCK-8细胞增殖实验表明,相比H1299-EGFP-NC细胞,H1299-EGFP-miR183细胞在接受4Gy X射线照射后,生存率增高(P<0.05);划痕愈合实验发现,H1299-EGFP-miR183细胞的划痕愈合时间相对缩短,细胞迁移能力增强(P<0.05);qPCR及Western Blot检测发现在基因及蛋白水平ZEB1、Vimentin在H1299-EGFP-miR183细胞中表达均增高,而E-cadherin表达均相对降低(P<0.05)。结论:1.持续X射线照射过程中,H1299细胞发生了EMT,其增殖活性增强,放射抗拒能力增加;2.miR-183在H1299细胞发生放射抗拒的过程中表达增高,并在其中发挥重要作用:过表达miR-183的表达,可能会促进H1299细胞发生EMT,且增强其增殖、迁移及放射抗拒的能力;下调miR-183的表达,可能会逆转H1299R细胞的EMT过程,且减弱其增殖、迁移及放射抗拒的能力。