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瓦尼木层孔菌(Phellinus vaninii)是一种药用真菌,具有抑制肿瘤活性、解毒、补肾、增强人体免疫力、防治癌症等功效。目前,对瓦尼木层孔菌的研究主要集中在人工栽培和菌丝体特性方面,对其多糖提取的研究却鲜有报道。
本研究以瓦尼木层孔菌为研究对象,研究液体发酵条件对瓦尼木层孔菌菌丝体生物量和菌丝体多糖产量的影响,对瓦尼木层孔菌菌丝体多糖提取工艺进行优化,利用阴离子交换柱层析技术、凝胶柱层析技术分离纯化瓦尼木层孔菌菌丝体多糖,并分析其单糖组成。结果如下:
1.以液体发酵获得的菌丝体生物量和菌丝体多糖产量为指标,通过单因素实验和正交实验,确定适合瓦尼木层孔菌液体发酵的最佳培养基配方为:麦麸3%、黄豆粉0.7%、KH2PO40.2%、MgSO40.15%;最佳发酵时间为10d,接种量为10%(v/v),培养温度为25℃。在此条件下,菌丝体生物量和菌丝体多糖产量分别为6.92g/L和76.84mg/g。
2.在瓦尼木层孔菌菌丝体多糖提取过程中,对提取温度、提取时间、水料比这三个因素进行响应面分析,结果表明菌丝体多糖的最佳提取温度为81℃,提取时间2.1h,水料比32∶1,在此条件下多糖得率为10.5%。
3.采用DEAE Sephadex A-50对瓦尼木层孔菌菌丝体多糖进行分离纯化,得到两个洗脱峰:IPS-Ⅰ和IPS-Ⅱ,DPPH自由基的清除率分别为71.94%(多糖浓度0.58mg/mL)和79.25%(多糖浓度1.05mg/mL)。IPS-Ⅰ经SephacrylTM S-300 HR纯化后,得到单一峰(IPS-Ⅰ-Ⅰ)。
4.高效液相色谱分析表明:IPS-Ⅰ-Ⅰ是由鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖和半乳糖四种单糖组成,其摩尔比为4.3∶0.85∶1.1∶0.72。