2-氨基乙氧基苯硼酸(2-APB)是目前研究钙库释放激活钙通道（CRAC）时常用的药物之一，它对CRAC的抑制作用在很多报道中已得到证实，但其机制尚不清楚。目前研究表明CRAC通道包括两个核心部件：STIM1和Orai1，前者是通道位于内质网上的钙离子感受器，后者是在细胞膜上的通道孔道。内质网（ER）中钙库储存的钙离子的消耗会促使STIM1的重新分布，STIM1会向细胞膜靠近聚集形成斑片状（puncta），STIM1和Orai1偶联相互作用引发Ca2+通过Orai1进入细胞内。这一过程中产生的Ca2+内向电流，称之为钙库操纵的钙内流（SOCE）。但有关STIM1与Orai1偶联的具体机制有待进一步的研究。我们的研究确证了STIM1 puncta的形成存在两种机制：Orai1依赖性机制和赖氨酸富集区（polybasic）依赖性机制。并在此基础上进一步观察了2-APB对STIM1动力学以及SOCE的影响。　　一、STIM1 puncta的形成存在两种机制　　在HEK293T细胞中分别转染STIM1和Orai1时，经共聚焦显微镜观察发现：过表达STIM1的细胞，在钙库耗竭后，可以看到STIM1 puncta的形成，而过表达Orai1的细胞中没有形成puncta结构。在共表达STIM1和Orai1的细胞中，钙库耗竭后能够形成完全共定位的puncta。此外，构建了STIM1 C末端polybasic结构域缺失和CAD结构域的表达载体mCherry-STIM1-△K和CAD-ECFP。我们发现单独转染mCherry-STIM1-△K的细胞在钙库耗竭后没有形成puncta结构；共表达mCherry-STIM1-△K和Orai-eYFP时，它们会恢复形成puncta的能力，并在puncta的位置有明显共定位。在HEK293T中单转CAD-ECFP时，发现CAD在胞浆均匀分布，而与Orai1共表达后，CAD定位于细胞膜处，并且和Orai1高度共定位。这些结果与早期的报道一致，由此推断，STIM1 puncta的形成存在两种机制。　　二、2-APB阻断STIM1 puncta形成的polybasic依赖性途径　　发现在HEK293T细胞中单独过表达STIM1时，2-APB能够抑制STIM1 puncta的形成，同时能够解聚形成的STIM1 puncta，并呈一定的剂量依赖关系。我们的实验还证实了高浓度的2-APB能够显著的抑制STIM1动态的“彗星”样运动。　　三、2-APB对STIM1 puncta形成的Orai11依赖性途径没有抑制作用　　在HEK293T中共表达STIM1-△K和Orai1，或者全长的STIM1和Orai1时，2-APB会失去抑制STIM1 puncta形成的能力，也不能解散钙库耗竭引起的STIM1重排成的puncta。同时通过可视化方法我们发现在HEK293中共表达CAD和Orai1后，2-APB不能阻断CAD和Orai1的相互作用。因此，推测2-APB在STIM1 puncta形成的两种机制中是存在不同的作用。我们的实验表明高浓度的2-APB对HEK293T细胞中的SOCE有明显抑制作用。我们利用钙成像技术来检测2-APB对HEK293T细胞中SOCE的影响。通过使用肌浆网钙泵（SERCA泵）抑制剂将胞内钙池内的钙离子消耗掉，一段时间后再恢复胞外Ca2+至2mM。持续监测Ca2+电流随时间的变化。细胞经50μM的2-APB处理后，观察到SOCE大幅度降低。50μM的2-APB就几乎可以完全阻断TG刺激产生的SOCE。