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研究目的:探索建立前置处理-超声结合化学处理的方法制备小肠粘膜下层,并依次从组织学、化学试剂残留量测定、细胞毒性、组织相容性、组织修复功能验证等方面评价制备的小肠粘膜下层生物学性能。 研究方法:采用超声生物技术,结合胰酶、SDS试剂,处理经过机械刮除小肠浆膜、肌层、粘膜层等前置处理的小肠粘膜下层;将样品用固定剂固定后,在光学显微镜和真空扫描电子显微镜下观察并比较脱细胞处理前后小肠粘膜下层胶原结构;采用亚甲基蓝-分光光度法检测小肠粘膜下层材料残留的SDS含量;体外培养L929细胞,制备材料浸提液,采用MTT法计算细胞相对增殖率,判定材料的细胞毒性;大鼠皮下埋入材料,通过观察局部反应评价制备的SIS材料的组织相容性;建立大鼠腹壁缺损模型,以脱细胞真皮基质为对照,比较两组材料在大体观察、粘连评分、组织学观察方面差异,评价小肠粘膜下层对腹壁缺损的修复能力。 研究结果:光学显微镜和真空扫描电子显微镜下观察,制备的SIS材料无细胞残留成分,基质成分未发生明显变化;采用亚甲基蓝-分光光度法检测材料清洗液中SDS含量轻微,对人体无副作用;细胞毒性实验显示,制备的SIS材料细胞毒性评价为1级,符合体内植入性医用材料要求;皮下埋入实验显示,术后8周制备的SIS材料基本上降解完毕,胶原纤维结构不可见,几乎全部被机体组织包裹、吸收,新生成的纤维结构纤细、松散、平型排列。小肠粘膜下层修复组织缺损术后24周观察,材料胶原纤维全都被机体组织包裹、吸收,被平行或交错分布的纤维结缔组织替代,形成了成熟的肉芽组织,粘连反应轻微,无感染、疝的发生。 研究结论:采用前置处理-超声联合化学处理的方法可有效去除残留细胞成分,并保留其完整的三维结构;制备的材料SDS残留量轻微,细胞毒性低,具有良好的组织相容性和生物可降解性;可有效修复腹壁缺损,是用于组织修复重建的良好基质。