目的:建立抗血小板药物氯吡格雷及其活性代谢产物的LC-MS/MS同时测定方法,通过比较合用四种中药复方制剂(溶栓胶囊、血脂康胶囊、心元胶囊和松龄血脉康胶囊)前后大鼠体内氯吡格雷活性代谢产物(以其衍生物表示)药动学参数的变化,探讨四种中药复方制剂对氯吡格雷活性代谢产物的药动学是否有影响。方法:色谱条件:色谱柱为Diamonsil C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈:1 mmol/L乙酸铵溶液:甲酸(80:20:0.01,V/V/V),流速为1.0 m L/min,柱温为40°C,进样量为10μL,内标为噻氯匹定。质谱条件:离子化方式:电喷雾离子化源(ESI);检测方式:正离子模式;扫描方式:多反应监测(MRM);离子源喷射电压:5500 V;离子源温度:550°C;气帘气(CUR)压力:25 psi;雾化气NEB(GS1,N2)压力:55 psi;辅助气AUX(GS2,N2)压力:50 psi;碰撞气(CAD)压力:4 psi;氯吡格雷的解离电压(DP)和碰撞能(CE)值分别为68 V和21 e V,活性代谢产物衍生物(CAMD)的DP和CE值分别为114 V和26 e V,噻氯匹定的DP和CE值分别为60 V和23 e V;用于定量分析的离子对分别为m/z 322.2→212.0(氯吡格雷),504.4→354.1(CAMD),264.2→154.1(噻氯匹定)。动物实验:健康雄性SD大鼠40只,随机分为对照组和4个实验组。实验组大鼠分别灌胃给予溶栓胶囊(75 mg/kg,3/日)、血脂康胶囊(60mg/kg,2/日)、心元胶囊(120 mg/kg,3/日)、松龄血脉康胶囊(150 mg/kg,3/日),连续给药7天;对照组大鼠灌胃给予等体积蒸馏水,连续7天。五组大鼠均于第8天分别灌胃给予溶栓胶囊(75 mg/kg)、血脂康胶囊(60mg/kg)、心元胶囊(120 mg/kg)、松龄血脉康胶囊(150 mg/kg)和等体积蒸馏水后灌胃给予氯吡格雷(7.5 mg/kg),并于给药前和给药后5、10、20、30、45 min、1、1.5、2、4、6、8、10 h眼内眦取血0.5 m L于含有20μL 125m M 2-溴-3’-甲氧基苯乙酮(MPB)的肝素钠抗凝离心管中,涡旋混合30 s,6500×g离心5 min后取血浆,-40°C冷冻保存待测。血浆处理方法:取血浆样品200μL,加入600μL含10.5 ng/m L内标的乙腈溶液,涡旋混合1 min,6500×g离心5 min,取上清液10μL进样测定。药动学参数处理:采用DAS 2.1.1软件对每只大鼠的系列血药浓度进行统计矩自动拟合,得到药动学参数;采用SPSS 17.0软件对实验组与对照组的主要药动学参数进行统计学分析。若比较的两组参数均服从正态分布,则选用两个独立样本的t检验进行分析;若其中一组不服从正态分布,则选用非参数检验进行分析。P值小于0.05则认为两组间差异有统计学意义。结果:氯吡格雷的保留时间为5.10 min,CAMD的保留时间为3.21min,噻氯匹定的保留时间为5.68 min,血浆内源性杂质对其浓度的测定无干扰;标准曲线分别为:氯吡格雷:Y=0.02075 X+0.00588(r=0.9992)(0.53~52.50 ng/m L),CAMD:Y=0.00800X-0.0005(r=0.9990)(2.00~200.00 ng/m L);氯吡格雷低(1.64 ng/m L)、中(6.56 ng/m L)、高(42.00 ng/m L)三个浓度的相对回收率分别为99.89%,100.29%,98.97%,绝对回收率分别为85.02%,85.47%,86.93%,CAMD低(6.25 ng/m L)、中(25.00 ng/m L)、高(160.00 ng/m L)三个浓度的相对回收率分别为98.96%,97.98%,99.63%,绝对回收率分别为81.54%,82.50%,83.11%,噻氯匹定的绝对回收率为85.50%;氯吡格雷低、中、高三个浓度的日内精密度RSD分别为5.5%,2.6%,4.5%,日间精密度RSD分别为5.7%,4.0%,4.5%,CAMD低、中、高三个浓度的日内精密度RSD分别为1.6%,6.2%,4.7%,日间精密度RSD分别为6.0%,8.7%,5.3%;氯吡格雷、CAMD血浆样品于-40°C低温保存一个月及反复冻融三次后性质稳定,且处理后的血浆样品于室温放置8 h对测定无影响。对照组大鼠体内CAMD的主要药动学参数如下:AUC0-t:20574.45±5451.02 ng/m L·min,AUC0-∞:21532.80±6223.07 ng/m L·min,Cmax:207.50±79.33 ng/m L,Tmax:45.00±8.02 min,t1/2:147.11±70.92 min,CL:0.38±0.16 L/min/kg,V:76.02±27.96 L/kg。合用溶栓胶囊后,大鼠体内CAMD的主要药动学参数如下:AUC0-t:22584.72±8754.93 ng/m L·min,AUC0-∞:23705.66±9089.06 ng/m L·min,Cmax:184.00±58.91 ng/m L,Tmax:50.62±11.16 min,t1/2:150.69±35.81 min,CL:0.36±0.15 L/min/kg,V:79.29±37.18 L/kg。合用血脂康胶囊后,大鼠体内CAMD的主要药动学参数如下:AUC0-t:15338.44±2958.96 ng/m L·min,AUC0-∞:17989.99±5221.61ng/m L·min,Cmax:181.04±57.84 ng/m L,Tmax:28.12±9.98 min,t1/2:211.27±66.40 min,CL:0.44±0.10 L/min/kg,V:129.78±30.34 L/kg。合用心元胶囊后,大鼠体内CAMD的主要药动学参数如下:AUC0-t:19585.22±8037.93 ng/m L·min,AUC0-∞:21615.22±10084.68 ng/m L·min,Cmax:225.25±50.81 ng/m L,Tmax:38.12±9.98 min,t1/2:181.96±73.68 min,CL:0.40±0.14 L/min/kg,V:98.69±44.23 L/kg。合用松龄血脉康胶囊后,大鼠体内CAMD的主要药动学参数如下:AUC0-t:17804.36±6443.45ng/m L·min,AUC0-∞:19812.59±6111.02 ng/m L·min,Cmax:143.12±53.63ng/m L,Tmax:43.75±13.56 min,t1/2:217.56±132.35 min,CL:0.41±0.14L/min/kg,V:140.13±118.15 L/kg。与对照组相比,合用血脂康胶囊后药动学参数AUC0-t,Tmax明显减小(P<0.05),t1/2,V明显增大(P<0.05),且差异具有统计学意义;而合用溶栓胶囊、心元胶囊、松龄血脉康胶囊前后药动学参数变化无统计学意义(P>0.05)。结论:本文所建立的LC-MS/MS测定氯吡格雷活性代谢产物的方法简便、准确、灵敏度高、重现性好,适用于大鼠体内血浆中氯吡格雷活性代谢产物浓度的测定。合用血脂康胶囊后,活性代谢产物的暴露量减小,排泄减慢,体内存留时间延长。合用溶栓胶囊、心元胶囊、松龄血脉康胶囊后,大鼠体内氯吡格雷活性代谢产物的药动学参数变化均无统计学意义,临床应用时应注意氯吡格雷与血脂康胶囊联合使用时存在的氯吡格雷抵抗以及氯吡格雷活性代谢产物长期蓄积引起出血的风险,应尽量避免二者合用。