【摘 要】
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目的:通过离体小胶质细胞实验及小鼠脑出血模型,采用红系核转录因子（Nrf2）激动剂红曲素（血脂康）及Nrf2抑制剂siRNA和Nrf2-/-调控Nrf2,探索小胶质细胞在脑出血后内源性血肿清除中的作用,并阐明Nrf2对脑出血后小胶质细胞的功能影响,以期将来为脑出血治疗提供更为精准有效的治疗策略。方法:细胞实验:BV-2小胶质细胞培养（37℃、5%CO2孵箱中）,生长至对数期,q-PCR检测Nrf2
【基金项目】
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国家自然科学基金“Nrf2/Hx/LRP信号通路调控小胶质细胞M2型转化在脑出血后血红素清除中的作用及机制研究（编号:81771294）”；
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目的:通过离体小胶质细胞实验及小鼠脑出血模型,采用红系核转录因子（Nrf2）激动剂红曲素（血脂康）及Nrf2抑制剂siRNA和Nrf2-/-调控Nrf2,探索小胶质细胞在脑出血后内源性血肿清除中的作用,并阐明Nrf2对脑出血后小胶质细胞的功能影响,以期将来为脑出血治疗提供更为精准有效的治疗策略。方法:细胞实验:BV-2小胶质细胞培养（37℃、5%CO2孵箱中）,生长至对数期,q-PCR检测Nrf2基因表达,Nrf2-siRNA筛选最佳序列,红曲素及血脂康筛选最佳药物浓度。将培养的小胶质细胞分为四组:正常组、小胶质细胞+siRNA（100nmol/L）、小胶质细胞+红曲素（15uM）、小胶质细胞+血脂康（200ug/ml）共培养72小时,显微镜下观察红曲素/血脂康（Nrf2-激动剂）或Nrf2-siRNA对红细胞或荧光胶珠的吞噬清除功能。同时,通过流式细胞仪,免疫荧光和western blot检测上述不同组中CD80（小胶质细胞促炎表型M1的表型标记）/CD206（抗炎表型M2的表型标记）、促炎和抗炎细胞因子（如Trem1/TNF-α和Trem2/BDNF）的表达。动物实验:将小鼠分为五组:假手术组,脑出血组,脑出血+Nrf2-/-组（Nrf2基因敲除）,脑出血+红曲素组（10mg/kg/日,2次/日）,脑出血+血脂康组（0.2g/kg/日,2次/日）。通过立体定向仪引导,将IV型胶原酶注入小鼠大脑基底节区制备实验性ICH模型。采用Garcia scale评分法对脑出血后24h、3d的小鼠,进行神经功能缺损评分,并检测脑水含量及血红蛋白含量（见补充材料）。通过免疫荧光和western blot检测上述不同组中CD80（M1亚型标记）/CD206（M2亚型标记）、促炎和抗炎细胞因子（如Trem1/TNF-α和Trem2/BDNF）的表达。结果:红曲素及血脂康通过上调Nrf2增强小胶质细胞吞噬荧光胶珠及红细胞的能力,与其促进血肿清除的作用相一致。此外,体内及体外实验均显示红曲素及血脂康强化小胶质细胞Trem2,CD206和BDNF的表达,抑制Trem1,CD80、TNF-α的表达。而Nrf2抑制剂显示与Nrf2激动剂大致相反的结果。即,小胶质细胞Nrf2上调可抑制神经炎性反应,强化吞噬功能,有利于细胞向M2亚型转化,促进神经修复;而抑制Nrf2可恶化炎性反应,抑制吞噬功能,促进小胶质细胞向M1亚型转化,不利于神经修复。结论:脑出血后,通过Nrf2可调节小胶质细胞的吞噬功能、炎性反应及细胞表型转化,发挥其清除血肿、减轻脑水肿及促进神经修复的功能,明确Nrf2在脑出血血肿清除及神经保护中的作用机制。
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