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单增李斯特菌(L. monocytogenes)是一种在自然界广泛分布的食源性致病菌,绝大多数食品(肉类、禽类、海产品、蔬菜)都可能成为此菌污染对象。人类食用受污染的食物后,易得李斯特菌病,主要表现为脑膜炎、骨髓炎、败血病等,病死率高达20%-30%,远远超过其它常见的食源性致病菌。近年来,有关单增李斯特菌的食物中毒事件频频发生,引起人们普遍关注。单增李斯特菌的传统检测方法操作繁琐、检测时间较长且灵敏度较低,不能满足食品中致病菌快速、灵敏的检测需要。因此需要建立快速、灵敏的单增李斯特菌的检验方法。本研究基于单增李斯特菌MyA基因和李斯特菌属的16sRNA基因分别合成两对引物,对影响PCR的主要因素进行优化,建立可同时检测两个特异基因的PCR方法,即双重PCR方法及荧光PCR方法。将两种PCR检测方法分别与选择增菌法结合,应用在食品样品的检测中。此双重PCR方法特异性良好,对纯菌液的检测灵敏度为3.2×102CFU/mL,模拟污染的海螺检测限为4CFU/g。应用该双重PCR方法对市场随机抽取的126份新鲜海螺样品进行检测,检测结果经GB 4789.30-2010验证。验证结果表明,出现双条带的海螺样品为阳性样品,无条带出现或仅出现单一条带的海螺样品为阴性样品。126份海螺样品中共检出阳性样品16份,检出率为12.7%。此荧光PCR方法的反应液经凝胶电泳验证,结果显示,扩增出的两条不同大小、不同Tm值的目的核酸片段,分别对应两条荧光PCR溶解曲线上的两个独立波峰。基于单增李斯特菌hlyA基因建立标准曲线,相关系数为0.996,最低检出限约为89CFU/mL。应用荧光PCR检测蚬子样品中疑似纯菌株,所得阳性结果经GB 4789.30-2010验证,验证结果表明,荧光PCR实际检测阳性结果与GB 4789.30-2010检测结果完全一致。综上所述,本研究建立的两种PCR快速检测方法可快速检测食品样品中的阳性样品与阴性样品,准确率高,可作为食品样品中单增李斯特菌的初步鉴定方法。