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玉屏风（YPF）是由黄芪（RA）、白术（RAM）和防风（RS）组成的经典名方,广泛用于慢性支气管炎、过敏性鼻炎、肾炎以及部分免疫系统疾病的治疗。玉屏风成分复杂,仅用黄芪甲苷单一成分进行质控,不能全面反映该复方的特性。因此,选择中药方剂中有代表性的多种活性成分作为效应主成分群,进行中药复方制剂药效物质基础研究,并进行质量控制具有重要意义。目前常用中药质量控制方法主要有中药指纹图谱技术、化学计量学方法、有效成分与药效结合方法。为了深入研究玉屏风抗炎作用的物质基础,提高质控标准,本研究根据文献调研与指纹图谱研究筛选出13个化合物作为研究对象,探讨效应主成分群对骨髓巨噬细胞（BMMs）炎症因子分泌的影响,揭示可能的有效抗炎成分;应用LC-MS/MS技术建立玉屏风抗炎有效成分的分析方法,通过系统分析、定性和定量相结合的方式,建立新的玉屏风制剂质量控制方法,为中药复方制剂有效成分以及其质量控制研究提供实验依据。一、玉屏风效应主成分群的确定与定量分析目的:建立玉屏风提取物中多成分的UHPLC/MSn定量测定方法,为玉屏风抗炎效应主成分群的研究提供支持。方法:通过对玉屏风及其黄芪、白术、防风三味药材的指纹图谱研究,结合文献进行药效学、药动学分析,选择该方所含升麻素苷、毛蕊异黄酮苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、芒柄花苷、亥茅酚苷、芒柄花素、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅰ、白术内酯Ⅲ、白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅰ等13种成分作为效应主成分群。采用ACQUITY UPLC?HSS T3（2.1?100 mm,1.8μm）色谱柱,乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相,进行梯度洗脱,流速0.5 mL·min-1。质谱离子源为电喷雾离子化源（ESI）,采用选择性离子监测（SIM）与选择反应检测（SRM）相结合模式,对13个化合物进行定量检测分析。结果:上述13种成分在所建立的LC-MS/MS条件下各成分专属性良好,无明显干扰峰,各成分在检测范围内存在良好的线性关系,回收率在95%105%之间,RSD均小于3%。结论:该方法简便、快速、准确,弥补了其他检测方法的局限性,适用于中药质量控制。二、玉屏风对骨髓巨噬细胞分泌细胞因子的影响目的:揭示玉屏风效应主成分群对骨髓巨噬细胞分泌抗炎因子的影响,探讨玉屏风可能的有效抗炎成分。方法:采用Proteome ProfilerTM固相抗体芯片筛选与炎症相关的标志性细胞因子,利用ELISA方法观察13个化合物对骨髓巨噬细胞因子分泌的影响,筛选可能的有效抗炎成分。结果:骨髓巨噬细胞在13个化合物暴露24 h后,其中升麻素苷、毛蕊异黄酮苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、芒柄花苷、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅰ和白术内酯Ⅰ等9种成分可明显促进CXCL1、CXCL2和IL-1ra的表达。结论:升麻素苷、毛蕊异黄酮苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、芒柄花苷、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅰ和白术内酯Ⅰ等9种成分为可能的玉屏风抗炎有效成分。三、玉屏风质控方法的建立目的:建立快速检测玉屏风复方制剂抗炎有效成分的质控方法,为玉屏风的质量控制提供实验依据与技术方法。方法:建立一种快速、灵敏检测玉屏风9个成分的LC-MS/MS方法,并进行方法学验证。采用ACQUITY UPLC?HSS T3柱（2.1?100 mm,1.8μm）色谱柱,0.1%甲酸水溶液为水相,乙腈作为有机相进行梯度洗脱,SRM正离子采集模式对分析物进行检测。结果:本方法可在30 min内完成9种目标化合物的检测分析;专属性强、灵敏度高,其中升麻素苷、毛蕊异黄酮苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、芒柄花苷、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅰ和白术内酯Ⅰ的LLOQ为别为0.112、0.547、0.066、0.019、0.058、0.389、0.096、51.020、1.116 ng·mL-1;在一定范围内均有良好的线性关系（R2>0.99）,日内日间准确度在85115%之间,精密度（RSD）的范围0.093.75%（n=6）。结论:该方法简便、快速、专属性强、灵敏度高,可用于玉屏风制剂的质量控制。四、总结本研究在文献调研的基础上,结合玉屏风组方指纹图谱研究,从该方中筛选13种潜在的抗炎效应主成分,采用LTQ XL液质联用仪建立该效应主成分群的定性定量分析方法;采用Proteome ProfilerTM固相抗体芯片技术筛选出抗炎相关细胞因子,结合ELISA方法观察效应主成分群中各单体成分对骨髓巨噬细胞分泌CXCL1、CXCL2、IL-1ra的影响,发现玉屏风所含升麻素苷、毛蕊异黄酮苷、升麻素、5-O-甲基维斯阿米醇苷、芒柄花苷、黄芪甲苷、黄芪皂苷Ⅱ、黄芪皂苷Ⅰ和白术内酯Ⅰ9种成分与玉屏风的抗炎效应有关;采用LC-MS/MS建立快速检测玉屏风复方制剂抗炎有效成分的质控方法,结果表明,该方法简便快速、专属性强、灵敏度高,可用于玉屏风制剂的质量控制。本研究为提高和丰富玉屏风的质量控制提供了新方法,为更全面更精确地进行中药复方的质量控制提供了新线索。