论文部分内容阅读
胶质瘤（Glioma）是一种常见的原发性神经系统肿瘤，尽管对恶性肿瘤的诊断方法、治疗手段有很大的进步，而世界范围胶质瘤病人的预后却没有改善。近年来，胶质瘤的生物治疗取得了长足的进步，免疫治疗与基因治疗及二者相互结合构成了肿瘤生物治疗的主要部分。肿瘤内新生血管是肿瘤间质组成的一部分，不仅为原发肿瘤生长所必需，也是肿瘤细胞向远处播散的必备条件。Maniotis在1999年提出血管拟态（Vasculogenicmimicry，VM）的概念，它是由肿瘤细胞形成的微管结构，在多种恶性肿瘤中可以观察到VM，与不良的预后相关联。VM可作为肿瘤血管生成的重要补充，为肿瘤的抗血管治疗提供一个新的方向。垂体肿瘤转化基因（Pituitary Tumor Transforming Gene，PTTG）是从鼠垂体肿瘤细胞分离并确定的垂体洐生转化基因，它属于癌基因，过度表达可诱导肿瘤的发生，发展及侵袭。本课题研究PTTG与胶质瘤分级以及微血管密度的相关性；使用特异性siRNA干预胶质瘤细胞系U87、U251、SHG44中PTTG的表达，在体内及体外实验中研究PTTG对胶质瘤增殖、侵袭、迁移及血管生成的影响；探索PTTG影响胶质瘤血管生成调控的可能机制。目的：（1）研究PTTG与胶质瘤分级以及微血管密度的相关性；（2）使用特异性siRNA干预胶质瘤细胞系U87、U251、SHG44中PTTG的表达，在体内及体外实验中研究PTTG对胶质瘤增殖、侵袭、迁移及血管生成的影响；（3）探索PTTG影响胶质瘤生物学行为的可能机制。方法：（1）获取72例胶质瘤标本，根据病理结果按照WHO分级标准进行分级，使用免疫组化检测标本中PTTG的表达，研究PTTG与胶质瘤级别的相关性；根据PTTG表达强度进行分级，使用CD31标记血管内皮细胞，研究PTTG表达强度与微血管密度（MVD）之间的关系；（2）构建特异性针对PTTG的siRNA，并连接至质粒载体，转染至胶质瘤细胞系U87、U251或SHG44中，检测细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移、血管拟态等变化，并检测相关蛋白表达的改变；将U251细胞种植于裸鼠皮下，构建动物模型，21天后给予siRNA质粒局部注射，连续28天，检测体内试验中肿瘤生长速度及血管生成的差异，同时检测相关蛋白的表达变化。结果：（1）PTTG在正常组织、WHO I-IV级表达阳性率分别为20%、67%、80%、85%、100%，结果具有显著差异（p<0.05）；不同级别组MVD分别为18.58±6.97、26.25±8.56、39.45±12.12、53.45±13.07，结果具有显著差异（p<0.05）；在不同PTTG表达强度组（-、+、++、+++）胶质瘤MVD分别为17.91±6.89、27.14±9.16、43.43±14.97、56.56±6.57，结果具有显著差异（p<0.05）；（2）给予PTTG-siRNA转染后，PTTG表达受到明显抑制，胶质瘤细胞系增殖、迁移、侵袭及血管拟态能力下降，凋亡率上升；在体内实验中，PTTG-siRNA组胶质瘤生长速度明显减缓，MVD及血管拟态密度明显下降；siRNA转染后，诱导细胞凋亡的蛋白p53等上调，而抑制凋亡的蛋白表达下降，与肿瘤迁移、侵袭、血管生成相关的蛋白表达下降。结论：随着胶质瘤级别的增高PTTG表达增高，并与肿瘤微血管密度（MVD）密切相关；给予PTTG基因沉默后，胶质瘤的增殖、迁移、侵袭以及血管生成均受到明显抑制；在体内实验中，PTTG沉默有明显的抑制肿瘤生长及血管生成的效果。本研究表明，PTTG可以作为胶质瘤抗血管治疗的一个靶点。