目的肿瘤热休克蛋白70-多肽复合物（HSP70-PCs）可诱导机体特异性的抗肿瘤免疫应答。含CpG寡脱氧核苷酸（CpG-ODN）能非特异性地激活机体免疫应答。本实验通过建立肝癌细胞Hepa1-6移植瘤模型，研究两种物质联合运用对模型的治疗作用，进一步探讨其发生作用的机制，为肿瘤的免疫治疗提供有价值的实验依据。方法1.HSP70-PCs的分离纯化、鉴定：体外大量培养、扩增小鼠肝癌细胞Hepa1-6。经裂解、破碎、超离、ConA Sepharose亲和柱、DEAE-52交换柱后，收集目的峰蛋白，运用SDS-PAGE进行分子量测定、Western-blot法定性分析，Bradford改良法测定纯化后蛋白的浓度。2.建立荷瘤小鼠模型：于C57BL/6j小鼠一侧背部皮下接种4*10~7/ml的Hepa1-6细胞悬液0.1ml，即4*10~6/只。3.分组治疗、观察及检测：取上述荷瘤鼠40只，随机分成4组，每组10只，即对照组、CpG-ODN治疗组（C组）、HSP70-PCs组（H组）及CpG-ODN联合HSP70-PCs治疗组（L+H组）。C组和C+H组予CpG-ODN100ug/只瘤旁皮下注射，每周2次，共8次；H组和C+H组予HSP70-PCs10ug/只肿瘤对侧背部皮下注射，每周1次，共4次。对照组皮下注射生理盐水0.1ml/只，每周1次，共4次。测量皮下移植瘤大小，绘出生长曲线。对于死亡小鼠，记录生存时间，剥离瘤体称重，打开胸、腹腔，查找有无转移灶。对照组荷瘤鼠死亡一半时，各组均取出5只小鼠，采集外周血取上层血清ELISA法检测细胞因子IFN-γ及趋化性细胞因子CXCL-10水平。结果1.经二次层析后，得到分子量约为70kDa蛋白质，经免疫印迹证实该蛋白质即HSP70-PCs；2.所有小鼠均于1wk后在接种部位出现米粒大小皮下结节（即肿瘤），成功率为100%，未出现接种相关性死亡；3.实验观察时间为90d。C组和H组肿瘤体积均显著小于对照组（P<0.01），但C组和H组之间差异无统计学意义；C组和H组肿瘤质量也均显著小于对照组（P<0.01），其中两组各有2只实验鼠获得长期无瘤生存，但C组和H组之间差异无统计学意义。对照组肿瘤转移率为40%，C组和H组经解剖均未发现转移。联合治疗组均获得长期无瘤生存，与对照组、C组及H组差异显著（P<0.01），未发现肿瘤转移。C组、H组生存时间分别为>78.8±12.3d、>80.6±10.1d，与对照组57.0±7.3d差异显著（P<0.01），但两组间无明显差异。联合治疗组生存时间均>90d；4.治疗组外周血两种细胞因子水平均显著高于对照组（P<0.01）。H组IFN-γ水平较C高（P<0.05），两组CXCL-10水平差异无统计学意义（P=0.06）。联合治疗组两种细胞因子水平均显著高于C组和H组（P<0.01）结论1.运用Con A Sepharose柱亲和层析和DEAE-52柱离子交换后，可纯化得到高纯度的HSP70-PCs；2.HSP70-PCs和CpG-ODN联合运用，存在协同作用，共同通过激发荷瘤体的Th1型免疫应答发挥作用。