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背景新生血管性青光眼(neovascularglaucoma,NVG)是一组以虹膜和房角新生血管为主要特点的难治性青光眼。其病因主要是长期的视网膜供血供氧不足、炎症或手术外伤等,大多继发于血管阻塞性疾病和糖尿病视网膜病变,是一种破坏性极强可致盲眼病。NVG的形成是逐渐发展变化的过程,虹膜新生血管(iris neovascularization,NVI)的形成是NVG发生的前提,即NVI不及时治疗会进展为房角关闭,诱发眼压升高而继发NVG。大量研究证实,新生血管性青光眼患者的血浆及房水中ET-1及VEGF水平均升高,但具体关系尚不清楚。目的探讨缺氧条件下TM与RPE共培养体系中ET-1与VEGF表达量的变化及相互关系。方法分别采取改良组织块培养法和胰酶消化法提取新鲜牛眼小梁细胞及牛眼视网膜色素上皮细胞,根据细胞形态鉴定TM和RPE。将第3代TM细胞接种于6孔Transwell小室下层,将第3代牛眼RPE细胞接种于6孔Transwell小室上层并分为正常对照组、单纯缺氧组、缺氧+ET-1拮抗剂组、缺氧+VEGF拮抗剂组,分别在2ml培养基中加入40μlPBS、40μlCoCl2工作液(终浓度为200μmol/L)、40μlCoCl2工作液(终浓度为200μmol/L)+2μl内皮素受体拮抗剂工作液(终浓度为 10-5μmol/L)、40μlCoCl2工作液(终浓度为 200 μmol/L)+20 μlVEGF 受体拮抗剂工作液(终浓度为10-8μmol/L),继续培养24h。选用RT-PCR检测各组细胞内ET-1 mRNA和VEGF mRNA的相对表达量;选用免疫细胞化学法检测各组细胞内抗原水平量的变化。结果RT-PCR检测结果显示,ET-1 mRNA的相对表达量正常对照组为0.90 ±0.15、缺氧组为1.77±0.08、缺氧+抗ET-1受体拮抗剂组为0.54±0.04、缺氧+抗VEGF受体拮抗剂组为1.26 ±0.09,每两组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。VEGFmRNA的相对表达量对照组为0.99±0.01、缺氧组为1.68±0.06、缺氧+ET-1受体拮抗剂组为1.26 ±0.07、缺氧+VEGF受体拮抗剂组为0.59 ±0.04,每两组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。免疫细胞化学结果显示,ET-1阳性目标积分光密度对照组为44167 ±727.9、缺氧组为80288 ±960、缺氧+ET-1受体拮抗剂组为35672 ± 1090、缺氧+VEGF受体拮抗剂组为54294 ± 1304,每两组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。表3-4结果显示,VEGF阳性目标积分光密度对照组为228264 ± 10021、缺氧组为418205 ± 23377、缺氧+抗ET-1受体拮抗剂组为377198 ± 37025、缺氧+抗VEGF受体拮抗剂组为53873 ±9662,每两组之间差异均有统计学意义(P<0.05)。结论牛眼小梁细胞和视网膜色素上皮细胞共培养体系在缺氧条件下ET-1及VEGF表达水平均上调,分别加入ET-1和VEGF受体拮抗剂后对对方和自身因子的表达呈现不同程度下调作用,推测在新生血管性青光眼发病过程中ET-1和VEGF之间存在协同作用。