端粒酶反义RNA与bcl-2核酶对肝癌细胞端粒酶活性表达及细胞凋亡的影响

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正常体细胞因缺乏端粒酶的活性表达,导致端粒片断的丢失,细胞衰老死亡;而恶性肿瘤则因端粒酶的活化,克服了端粒缩短而获得无限增殖的能力。端粒酶活化被认为是恶性肿瘤细胞无限增殖的分子基础,在恶性肿瘤的发病学上具有重要的意义。抑制细胞端粒酶的活性,将导致瘤细胞端粒序列重新变短并激活细胞衰老途径。因此,端粒酶可以作为恶性肿瘤治疗的理想靶目标。肝细胞肝癌是常见的恶性肿瘤之一,严重地危害着人类的身体健康。本实验在本室以往的研究基础上,首先运用原位杂交技术检测了端粒酶RNA在原发性肝癌组织中的表达情况;然后,采用基因转移技术,结合TRAP法、流式细胞仪、TUNEL、细胞生物学和电镜等检测技术,就人端粒酶反义RNA对肝癌细胞的生物学作用进行了观察。结果发现,在人原发性肝癌组织中,均可检测到人端粒酶RNA的显著表达,而在肝硬变和癌周组织中低表达或不表达;在肝癌组与非肝癌组之间存在显著的差别(p<0.05)。转染人端粒酶反义RNA能显著抑制SMMC7721细胞端粒酶活性表达:TRAP-PCR-ELISA法检测显示,SMMC7721细胞表达高水平的端粒酶活性,吸光度(A450-A630)值为2.861,而转染端粒酶反义RNA的SMMC7721细胞端粒酶活性表达显著下降,吸光度(A450-A630)值仅为0.980。人端粒酶反义RNA在显著抑制SMMC7721细胞端粒酶活性表达的同时,对细胞增殖也产生抑制作用,引起细胞发生G1期阻滞,延缓细胞生长。转染人端粒酶反义RNA,还导致细胞发生显著的凋亡:经流式细胞仪测定,在细胞周期G1期前有凋亡峰出现,凋亡细胞占细胞总数的13.8%,形态学观察也得出相同的结论。此外,人端粒酶反义RNA抑制SMMC7721细胞的端粒酶活性表达,
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