检疫性害虫——枣实蝇分子生物学快速鉴定技术研究

来源 :新疆农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:storm_shen
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枣实蝇(Carpomya vesuviana Costa)是2007年首次在新疆吐鲁番地区发现的重大检疫性害虫,系在新疆乃至全国枣产业上有着重要经济意义的害虫。枣实蝇的鉴定是国内外枣贸易中最突出的技术问题之一,建立检疫性枣实蝇特别是未成熟虫态快速可靠的鉴定方法在植物检疫上有重要意义。本研究以国内普遍关注的检疫性害虫枣实蝇为研究对象,测定了枣实蝇的mtDNA COI和Cytb基因部分序列,将获得的基因片段与已公开报道的其它同源序列进行比较分析,设计了枣实蝇15对引物基础上,应用种特异引物PCR(SS-PCR)和SYBR Green实时荧光PCR技术,筛选出了枣实蝇的特异性引物,在此基础上研发了检疫性枣实蝇的分子生物学快速鉴定技术。主要研究结果如下:1.首次提取了枣实蝇基因组DNA,分别测定枣实蝇mtDNACOI两段不同的基因序列和cytb部分基因序列;首次将吐鲁番枣实蝇序列录入GenBank数据库,序列号分为HQ687210,JX515609和JX101439。2.首次以目标枣实蝇线粒体DNA(mtDNA)中COI基因序列(GenBank序列号:HQ687210)为目标序列,借助Mega4软件(DNASTAR公司,美国)中CLUSTAL方法,与己知其它种类的实蝇的COI基因序列(包括本研究和其它公开报道的序列)进行比较分析,通过筛选获得能特异鉴定枣实蝇的引物1对,从而建立了枣实蝇特异引物PCR鉴定技术。3.本研究应用PCR—RFLP技术,将新入侵的检疫性害虫枣实蝇比对我国口岸截获频率较高的5种检疫性实蝇进行快速鉴定,其目的在于寻找出适用于新入侵检疫性害虫枣实蝇快速而又准确的鉴定技术。4.利用自行设计的特异引物,应用SYBR Green实时荧光PCR技术,建立了SYBR Green实时荧光PCR(SG-PCR)快速鉴定枣实蝇的方法,SYBR Green实时荧光PCR产物特异性通过溶解曲线分析来确认。5.首次克隆了检疫性害虫枣实不同地理种群mtDNA COI基因从M7至COOH之间的片段,从而初步建立了枣实蝇的基因片段库,为枣实蝇的分子生物学鉴定和分子系统发育等相关研究提供数据。
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