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目的:在前期临床和实验有效基础上,从细胞因子CD40L及平突散系列复方对人球后成纤维细胞的MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2表达的影响,探讨泻火平突散、活血平突散、养目平突散治疗TAO的机制。 方法:⑴培养RFs并进行鉴定。复苏冻存的2-8代间RFs并对细胞形态进行观察及鉴定。⑵CD40L和三种含药血清共同孵育后用免疫细胞化学染色法检测MMP-1、MMP-2、TIMP-1、TIMP-2表达的影响。 结果:①成功复苏体外培养的球后成纤维细胞,在光镜下观察可见细胞形状为梭形和多角形,2-3天后细胞平铺覆盖瓶壁面积的80%-90%。细胞鉴定的免疫细胞化学染色结果为纤维原细胞的标记细胞波形蛋白(vimentin)为阳性,细胞角蛋白(cytokeration)为阴性,判定为RFs。②CD40L刺激后MMP-1、MMP-2表达下降,TIMP-1、TIMP-2表达上调;平突散系列复方含药血清干预后MMP-1、MMP-2表达上调、TIMP-1、TIMP-2表达下降。③CD40L刺激后较未刺激前MMPs/TIMPs比值下降;平突散系列复方含药血清干预后较CD40L刺激后MMPs/TIMPs比值上升。④养目平突散在平突散系列复方中对恢复MMPs/TIMPs平衡的效果最好。 结论:CD40L刺激后的人球后成纤维细胞MMPs/TIMPs失衡,中药含药血清能恢复MMPs/TIMPs平衡,通过阻断CD40-CD40L共刺激通路来抑制RFs细胞外基质的沉积,而达到治疗TAO的目的。其中,养目平突散效果最佳。