共振光散射技术在蛋白质分析中的研究及其应用

来源 :青海师范大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gelsy1982
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蛋白质是生物体中含量最高,功能最重要的生物大分子,与生命的起源和进化都密切相关,因此蛋白质也是生命科学中极为重要的研究对象。关于蛋白质的分析研究,一直是化学家及生物学家极为关注的问题,其含量的测定在生化分析和临床分析中具有重要意义。随着生命科学、生物工程和环境科学等学科的迅速发展,分析科学同时面临着新的机遇和挑战。随着分析对象的日益复杂化,对复杂基体中痕量和超痕量组分的分离和检测成为突出问题。因此,本论文以建立对蛋白质和药物痕量组分的分析为目的,建立了测定蛋白质的共振光散射新方法和高选择性的测定抗坏血酸的分子印迹—化学发光分析法,并对各实验条件进行研究和优化,主要进行了以下几方面的创新性研究工作。1.利用共振光散射光谱和电子吸收光谱研究了藻红-Cu(Ⅱ)配合物与BSA的作用机理,并建立了藻红-Cu(Ⅱ)配合物作为探针测定痕量蛋白质的方法。在pH3.78的BR缓冲溶液中,蛋白质对藻红-Cu(Ⅱ)配合物338nm处的散射峰有强烈的增强作用。该体系已成功应用于人工混合样品中BSA的测定。其最大相对标准偏差小于2%,回收率在95%-98%。2.在pH=3.29的BR缓冲溶液中,蛋白质对酸性铬兰K-Cu(Ⅱ)配合物在471nm处散射峰有强烈的增强作用,建立了一个测定蛋白质的共振光散射新方法。与其他光度法相比,该方法具有反应快、灵敏度高、干扰小、线性范围宽等优点。该方法的线性范围为0.2~6.0μg/mL,方法检出限为0.12μg/mL。对11份含有5μg/mL的BSA标准溶液进行了精密度检验,其相对标准偏差为2.8%。该方法已成功应用于人工混合样品中BSA的测定,结果令人满意。3.利用逐步聚合反应,以抗坏血酸为模板分子,聚乙二醇作为致孔剂,二乙烯三胺为固化剂与环氧树脂聚合,制备出了一种新型的抗坏血酸分子印迹聚合物。以此聚合物为分子识别物质,结合KMnO4-HCHO-抗坏血酸化学发光体系,建立了高选择性的测定抗坏血酸的分子印迹—化学发光分析法。该方法的线性范围为8.0×10-6~6.0×10-mol/L,检出限为5×10-7mol/L。该方法用于维生素C片中抗坏血酸含量的测定,结果令人满意。
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