肝窦阻塞综合征(Hepatic Sinusoidal obstruction syndrome,HSOS)是由于肝窦内皮细胞损伤致肝窦流出道阻塞,继而引起肝内窦性门脉高压,患者通常主诉肝区疼痛和黄疸症状,同时经过检查症状体现为肝腹水、肝肿大等,严重者发展为肝硬化,需要肝移植,甚至导致死亡。目前临床上尚未发现可以针对性治疗HSOS的药物。穿心莲内酯(Andrographolide,Andro)是清热解毒中药穿心莲所含的主要活性成分,具有抗炎,保肝利胆,抗病毒以及抗肿瘤等多种活性。实验室前期研究发现,Andro可以通过激活小鼠肝组织中的核因子E2相关因子-2(Nuclear factor erythroid 2-related factor 2,Nrf2)-抗氧化反应元件(Antioxidant response element,ARE)信号通路,改善对乙酰氨基酚所诱导的肝纤维化。然而,Andro对于HSOS是否具有治疗作用,目前尚未有相关研究报道。在本论文的研究中,首先在体内动物上考察了Andro对野百合碱(Monocrotalin,MCT)诱导HSOS的改善作用。以90 mg/kg MCT给药大鼠诱导HSOS模型,并在MCT给药后5 h与29 h再给药不同剂量Andro(0.05,0.1 mg/kg)。血清中谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)活力检测、肝组织中基质金属蛋白酶-9(Metalloproteinase-9,MMP-9)的表达、肝组织病理分析与扫描电镜观察的结果均提示,Andro可以改善MCT诱导的HSOS。其次,对动物肝组织活性氧(Reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)以及谷胱甘肽还原酶(Glutathione reductase,GR)活性的测定结果提示,Andro可以缓解MCT诱导肝组织的氧应激损伤。Western blot和Real-time PCR实验结果显示,Andro本身可以诱导肝组织中Nrf2的核转位激活,也可以进一步增加MCT诱导的肝组织中Nrf2核转位激活以及下游抗氧化酶的表达。透射电镜检测实验、肝组织线粒体中细胞色素C(Cytochrome C,Cyto C)的蛋白表达、肝组织中过氧化物酶体增殖活化受体γ共激活因子-1α(Peroxisome proliferator-activated receptor gamma,coactivator 1 alpha,PGC-1α)、核呼吸相关因子1(Nuclear respiratory factors1,NRF1)的蛋白表达以及线粒体DNA(Mitochondrial DNA,mt DNA)的Real-time PCR检测结果均提示,MCT可以造成肝组织中的线粒体损伤,而Andro能逆转这种损伤。接下去,在体外人肝窦内皮细胞(Human hepatic sinusoidal endothelial cell,HHSEC)和人正常肝L-02细胞上,进一步探索Andro诱导肝脏何种细胞中Nrf2/ARE信号通路的激活。Western blot和Real-time PCR实验结果显示,Andro可以显著增加HHSEC细胞和L-02细胞中Nrf2的核转位激活,并增加Nrf2下游抗氧化酶的表达。最后,在实验室前期构建的过表达ARE启动子区域结合荧光素酶的L-02细胞株上,采用荧光素酶报告基因实验(Luciferase reporter analysis)检测穿心莲中其它二萜内酯类化合物对Nrf2转录激活的影响。实验结果表明,这些二萜内酯类化合物中只有Andro能显著诱导Nrf2的激活。综上所述,Andro可以通过激活肝窦内皮细胞和肝实质细胞中Nrf2/ARE抗氧化信号通路,抵御MCT诱导的肝氧应激损伤,促进线粒体修复生成,缓解MCT诱导的HSOS。