目的：　　NLK在肝细胞癌、结直肠癌、卵巢癌、前列腺癌、胆管癌及胶质瘤等多种恶性肿瘤的发生和发展中扮演抑癌基因或促癌基因的重要作用，可能与肿瘤的来源及性质有关。　　但NLK在鼻咽癌中的表达和作用尚未研究，NLK是否可以作为鼻咽癌的诊断标志有待进一步探讨。　　方法：　　1.收集352例初始鼻咽癌患者的鼻咽癌样本，以及176例癌旁组织。收集患者的临床资料（年龄、性别、病理类型、初发症状分布、转移淋巴结，患者的临床分期）。所有患者在收集前未进行手术，根据临床记录确定患者死因。　　2.苏木素-伊红(HE)染色观察确定肿瘤分级。　　3.利用SABC免疫组化方法检测NLK在鼻咽癌的表达情况。　　4.利用Cox单因素和多因素回归分析NLK与鼻咽癌DFS和OS的相关性。　　5.Kaplan-Meier生存分析曲线分析NLK与鼻咽癌DFS和OS的相关性。　　6.体外培养人类鼻咽癌细胞系CNE2细胞株。　　7.siRNA干扰NLK在鼻咽癌细胞中的表达。　　8.Real time PCR检测NLK在鼻咽癌细胞中mRNA的表达变化。　　9.采用Western Blot检测鼻咽癌细胞中NLK蛋白水平表达变化。　　10.MTT细胞增殖实验检测NLK对鼻咽癌细胞增殖情况的影响。　　11.平板克隆形成实验检测NLK对鼻咽癌细胞的克隆形成率的影响。　　12.细胞划痕实验（迁移实验）检测NLK对鼻咽癌细胞迁移能力的影响。　　13.Transwell小室侵袭实验检测NLK对鼻咽癌细胞侵袭能力的影响。　　MTT检测siRNA干扰NLK后对细胞增殖的影响;克隆形成试验检测对肿瘤细胞克隆形成的影响。细胞划痕试验和Transwell小室检测NLK对鼻咽癌细胞迁移和侵袭能力的影响。　　14.Caspase3活性检测NLK对鼻咽癌细胞凋亡的影响。　　结果：　　1.收集的352例鼻咽癌患者临床资料进行分析，其中包括男性204例，女性148例，年龄12-69岁，平均年龄(45.2±17.9)岁，肿瘤TNM分期可见，肿瘤大小以T4期为主，共144例，占所有收集患者的40.9％，其次为T2和T3期患者。从局部淋巴结情况分析，多数患者处于N2-N3期，227例，占64.5％，其余的患者为N0-N1期患者。而远距离转移情况可见，多数患者处于M0期，223例，占63.4％，其余患者为M1期患者。TNM分期处于Ⅰ-Ⅱ患者101例，多数患者为Ⅲ-Ⅳ期患者251例，占71.3％。　　2.NLK阳性表达主要在细胞核内。在352例鼻咽癌肿瘤样本中，共190例患者肿瘤样本表达NLK，占54％，而NLK表达阴性的患者为162例，占46％。而NLK在176例鼻咽癌的癌旁组织中均不表达。　　3.NLK表达与鼻咽癌患者的性别无统计学差异(P=0.79)。NLK表达与鼻咽癌的组织类型包括未分化以及非角质组织型无统计学差异(P=0.58)。　　4.局部淋巴结和NLK表达的关系分析中表明，二者有有显著性差异(P=0.003)。而远处转移和NLK表达的关系分析中表明，二者有显著性差异(P＜0.001)。与肿瘤的大小和NLK表达的关系分析，二者有显著性差异(P=0.016)。说明NLK在鼻咽癌中的表达和TNM分期存在相关。　　5.在286例随访鼻咽癌患者中，随访期间共134例患者复发，占46.9％。利用Cox单因素回归分析，在NLK阳性鼻咽癌患者中复发风险是NLK表达阴性患者的3倍(危险比hazard ratio(HR)=2.94，95％可信区间confidence interval(95％(CI)=1.30-6.52，P=0.011)。因此，除了TNM分期以及肿瘤程度可以预测DFS情况(P=0.034; P=0.014)，在鼻咽癌患者中NLK过表达预示着其无病生存期(DFS)短，预后不良。而鼻咽癌患者的无病生存期(DFS)与患者性别、年龄等一般临床资料无关。同时与患者肿瘤组织类型和患者的淋巴结情况无关　　6.利用Kaplan-Meier生存分析方法进行分析，NLK表达阳性的鼻咽癌患者DFS显著变短，与NLK表达阴性的鼻咽癌患者比较，具有统计学差异(P=0.0012)。　　7.多因素生存分析NLK表达阳性的鼻咽癌患者具有显著的无病生存期缩短，独立于其他因素，NLK蛋白阳性的鼻咽癌患者更容易复发(HR=3.46，95％CI=0.96-5.87，P=0.013)。而其他因素包括患者性别、年龄等一般临床资料和复发以及DFS无相关性，同时与患者肿瘤组织类型和肿瘤大小程度、患者的淋巴结、TNM分级情况均无关。　　8.在可随访到的286例鼻咽癌患者中，117例患者死于随访期间，占40.9％。Cox单因素回归分析显示，NLK表达阳性的鼻咽癌患者死亡风险明显增加，与NLK表达阴性的鼻咽癌患者死亡风险比较，差异具有统计学意义(HR=2.77，95％CI=1.12-5.98，P=0.011)。强阳性的鼻咽癌患者总生存期不佳。肿瘤程度和TNM分期也是总生存期的显著预测因子(P=0.034和P=0.014)。　　9.利用Kaplan-Meier总生存期曲线分析显示，NLK表达阳性的鼻咽癌患者预后差，与NLK表达阴性的鼻咽癌患者预后比较，差异具有统计学意义(P＜0.001)　　10.在Cox多因素回归分析显示，NLK表达阳性的鼻咽癌患者预后结果差，具有显著的统计学差异(HR=2.77，95％ CI=1.12-5.98，P=0.011)。在经过患者性别，年龄，肿瘤组织学和TNM分期的调整后的Cox多因素回归分析，在鼻咽癌患者中，NLK表达阳性的是独立的诊断因子(HR=3.15，95％ CI=1.33-7.84，P=0.019)。　　11.Kaplan-Meie生存分析评估无远处转移的NLK表达阳性的鼻咽癌患者的DFS和总生存期，M0期NLK表达阳性的鼻咽癌患者的DFS和总生存期明显缩短，与M0期NLK表达阴性的鼻咽癌患者比较，具有统计学差异(P＜0.001和P=0.009)　　12.siRNA干扰NLK后，使NLK表达受到抑制，NLK mRNA表达减少，与对照组比较，差异具有统计学意义(P＜0.05)。　　13.siRNA干扰NLK后，使NLK表达受到抑制，NLK蛋白表达明显减少。　　14.siRNA干扰NLK后，NLK表达减少，可明显抑制肿瘤细胞的增殖，与对照组比较，差异具有统计学意义(P＜0.05)。　　15.siRNA干扰NLK后，NLK表达减少，可明显减少肿瘤细胞的克隆形成，与对照组比较，差异具有统计学意义(P＜0.05)。　　16.siRNA干扰NLK后，NLK表达减少，肿瘤细胞迁移受到抑制，迁移率明显减少，与对照组比较，差异具有统计学意义(P＜0.05)。　　17.siRNA干扰NLK后，NLK表达减少，肿瘤细胞迁移明显受到抑制，与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0.05)。　　18.siRNA干扰NLK后，NLK表达减少，虽肿瘤细胞Caspase活性有所减少，但与对照组比较，无统计学差异。　　结论：　　1.NLK可以作为鼻咽癌诊断的独立预测生物学标志。　　2.鼻咽癌组织中NLK阳性表达DFS和OS显著变短，容易复发，预后不良。　　3.NLK促进鼻咽癌细胞增殖和克隆形成。　　4.NLK增强鼻咽癌细胞侵袭和迁移能力。　　5.NLK不影响鼻咽癌细胞的凋亡.