目的：探讨成年大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)、大鼠乳鼠心肌细胞、心脏成纤维细胞在体外分离、培养的方法及大鼠骨髓间充质干细胞的标记方法；观察骨髓间充质干细胞、大鼠乳鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞的生物学特性；探讨心肌微环境中与诱导成年大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化相关的因素，为MSCs在心肌梗死类疾病中的临床应用提供实验依据。 方法：提取成年大鼠骨髓全骨髓培养法通过多次传代获取纯化的MSCs，经DAPI标记后分别与经胰蛋自酶顺序消化法及差速贴壁法获得的新生大鼠心肌组织内的心肌细胞和成纤维细胞体外共培养，同时分别收集心肌细胞和成纤维细胞培养上清液来制备条件培养液并作为条件培养基培养MSCs用以模拟心肌内微环境的不同成份对MSCs的作用。通过相差显微镜观察细胞形态学变化，荧光显微镜观察DAPI标记MSCs的效果，免疫荧光法分析共培养及条件培养后MSCs的心肌特异性抗原(肌肌钙蛋白)的表达以鉴定其向心肌样细胞分化情况。 结果：全骨髓培养法培养的骨髓间充质干细胞纯度高、细胞增殖能力强、细胞均一性较好。DAPI标记的MSCs荧光显微镜下发出明亮的蓝色荧光，标记率几乎100％，持续1周仍明显可见。培养的心肌细胞纯度达70-80％，贴壁生长良好培养，第3天就开始自发搏动，可持续2周。心脏成纤维细胞体外培养生长良好。心肌细胞直接接触共培养的MSCS有一部分表达心肌特异性肌钙蛋白T，而在其他培养条件下未发现MSCS表达心肌特异性肌钙蛋白T。 结论：全骨髓培养法是一种简便易行、有效分离骨髓间充质干细胞的方法；DAPI可以用来作为标记MSCs的一种有效手段；胰蛋白酶顺序消化法及差速贴壁法能有效分离培养心肌细胞和心脏成纤维细胞；MSCs与心肌细胞间的直接接触是心肌微环境中诱导MSCS分化为心肌样细胞的必要因素，而不是可溶性的化学信号和成纤维细胞。