MS-275对骨肉瘤细胞RECK基因表达的影响研究

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目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂恩替司他(Entinostat,MS-275)对骨肉瘤细胞RECK基因表达的影响。方法体外培养骨肉瘤细胞系MG-63,并根据不同的实验目的分为空白对照组和不同浓度MS-275处理组。其中对照组仅给予0.1%DMSO处理;MS-275干预组采用0.1,1.0,3.0μmol/L MS-275作用MG63细胞24~72h。采用WST-1法检测MS-275处理后MG-63细胞的增殖情况。提取细胞总RNA和蛋白,RT-PCR检测RECK mRNA和蛋白的表达情况。同时,采用荧光共振能量转移法检测基质金属蛋白酶(MMP)-9的酶活性。结果1. WST-1结果显示,在0.1~3μmol/L浓度范围内,MS-275可显著抑制MG-63细胞增殖,其中3μmol/L MS-275对MG-63细胞生长抑制率达46%。2. RT-PCR结果显示:RECK基因在MG-63细胞中表达较低。经0.1~3μmol/LMS-275处理后,RECK mRNA水平随着MS-275浓度的增高而递增。Westernblot结果也显示,不同浓度MS-275也能提高MG-63细胞中RECK蛋白的表达水平。3.酶活性结果显示,MG-63细胞上清液中MMP-9酶活性水平较高,经0.1~3μmol/L MS-275处理后,其酶活性随着浓度的增高而降低。其中3μmol/LMS-275可将其酶活性降低至43%。结论MS-275能上调RECK mRNA和蛋白表达水平,最终影响MMP-9的酶活性而发挥抗肿瘤作用。
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