抗生素在大肠杆菌病预防及治疗方面有着不可替代的作用，但是随着抗生素的不恰当使用，由耐药菌株引起的人及动物感染性疾病不断增加，大肠杆菌耐药及多重耐药现象已十分严重。为检测大肠杆菌的耐药水平，为大肠杆菌耐药基因检测芯片的研制提供阳性样本，解决大肠杆菌耐药性快速检测问题，我们从吉林省长春、通化、白城、梅河、延边和四平采集的疑似大肠杆菌病致死的鸡源、猪源、犬源和猫源病料样本96份。对采集样本进行分离、鉴定，获得大肠杆菌62株。采用平皿二倍稀释法对随机选取的20株大肠杆菌进行了针对诺氟沙星、庆大霉素、复方新诺明、强力霉素、氟苯尼考五种代表性药物的耐药性检测。受检大肠杆菌对喹诺酮类药物均耐药，其中高度耐药菌株6株；对氨基糖苷类药物耐药菌株19株，其中高度耐药菌株12株；对磺胺类药物耐药菌株20株，全部表现为高度耐药；对四环素类药物耐药菌株14株，其中高度耐药菌株11株；对氯霉素类药物耐药菌株1株。其中，对3种抗菌药物耐药的大肠杆菌为5株，占受检菌株的25％；对4种抗菌药物耐药的大肠杆菌为13株，占受检菌株的65％；对5种抗菌药物耐药的大肠杆菌为1株，占受检菌株的5％。监测结果表明，当前大肠杆菌耐药特点表现为高度耐药、多重交叉耐药。针对大肠杆菌主要耐药性基因GyrA、GyrB、ParC、AacC4、Sul2和TetA设计相应的特异性引物，进行PCR扩增，并对PCR产物进行克隆和测序，应用Clustalx1.83软件、MEGA3.1软件对测得序列分析。大肠杆菌5号菌株GyrA基因83位Ser突变为Leu，87位Asp突变为Asn；其ParC基因80 Ser位突变为Ile；NCBI-BLAST检索，PCR扩增片段与大肠杆菌同源性达98％以上；表明5号菌株GyrA基因可为大肠杆菌对喹诺酮类耐药基因检测芯片所用阳性样本的制备提供参考。大肠杆菌O78^R号菌株携带的AacC4基因，9号菌株、14号菌株、JX¹¹号菌株携带的Sul2基因和E_IR号菌株携带的TetA基因，分别可为制备大肠杆菌对氨基糖苷类药物、磺胺类药物和四环素类药物耐药基因检测芯片提供阳性样本。对临床分离大肠杆菌耐药基因的序列分析结果还表明，大肠杆菌对喹诺酮类药物高度耐药的O78^R号菌株GyrA基因的83位氨基酸发生突变、104位Asp被Gly取代、181位Asn被Asp取代，但87位氨基酸未发生突变；大肠杆菌对喹诺酮类药物低度耐药的8号菌株GyrA基因只发生一个氨基酸突变时，ParC基因也发生突变（80Ser→Ile）；上述两种耐药基因的突变特点未见相关文献报道。耐药大肠杆菌GyrA基因、ParC基因可能存在新的突变特点，因此，制备大肠杆菌对喹诺酮类药物耐药基因检测芯片时有必要考虑此种新突变特点。