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龙胆苦苷(Gentiopicroside, GE)为陕西省生物医药重点实验室独立开发的具有自主知识产权的中药1类新药,目前已完成Ⅰ、Ⅱ期临床实验,临床实验证明龙胆苦苷具有良好的保肝退黄功效。为了更好的应用于临床,了解潜在的药物相互作用,我们研究了GE体外对人肝细胞色素CYP450同工酶的影响。第一部分1：评价龙胆苦苷在体外对人原代肝细胞色素P450同工酶1A2和3A4的诱导作用。建立以非那西丁代谢产物对乙酰氨基酚的形成判断CYP4501A2活性和以睾酮代谢产物6β-羟基睾酮的形成判断CYP4503A4活性的LC-MS/MS的检测方法,其中对乙酰氨基酚的保留时间为2.05 min,6β-羟基睾酮的保留时间为2.6 min。人原代培养肝细胞与GE或同工酶相应的阳性诱导剂(奥美拉唑、利福平)于37℃,5%CO2条件下预培养2天,然后将CYP1A2或3A4亚酶的探针底物(非那西丁、睾酮)于37℃,5%CO2条件下与细胞共培养60分钟。LC-MS/MS检测其相应的代谢产物,并与其对照组相比较,以判断化合物对亚酶的诱导能力。第二部分：评价龙胆苦苷对人原代肝细胞色素P450同工酶1A2、2A6、2C9、2C19、2D6、2E1和3A4的体外抑制作用。分别建立CYP450同工酶相应探针底物的代谢产物的LC-MS/MS的检测方法。CYP450同工酶相应的探针底物与代谢产物(CYP4501A2:非那西丁—对乙酰氨基酚,CYP2A6:香豆素—7-羟基香豆素,CYP4502C9:双氯芬酸—4’-羟基双氯芬酸,CYP4502C19:S-美酚妥因—4’-羟基美芬妥英,CYP4502D6:右美沙芬—去甲基右美沙芬,CYP4502E1:氯唑沙宗—6-羟基氯唑沙宗,CYP4503A4:睾酮—6β-羟基睾酮)。将浓度为1、5、10、50、100,500、1000μg·mL-1的GE分别与人肝微粒体在不加辅酶的条件下于37℃预培养15分钟后,分别加入CYP1A2、2A6、2C9、2C19、2D6、2E1和3A4的探针底物,在加入辅酶后于37℃孵育30分钟,用4倍量的含内标的预冷甲醇终止反应,离心取上清后上LC-MS/MS检测相应的代谢产物,与各亚酶的阴性对照组进行比较,以判断化合物对各亚酶的抑制作用。用溶媒(有机溶剂含量与实验组一致)与人肝微粒体在不加辅酶的条件下于37℃预培养15分钟后,分别加入探针底物及辅酶于37℃共同孵育30分钟,LC-MS/MS检测各探针底物的代谢产物作为阴性对照,以判断化合物对亚酶的抑制能力,结果表明龙胆苦苷在10-1000μg/ml对CYP2A6、2C19和2E1具有抑制作用。可以导致与其代谢相关的药物在体内的代谢速度减慢,血药浓度升高以及体内蓄积,毒性增强。因此在对其进行后期临床用药具有指导意义。在临床用药过程中,与CYP2A6,2C19,2E1代谢相关的药物以及食物合用时,需密切监测不良反应