雌性性早熟大鼠下丘脑GABA_A受体α亚基的表达及滋阴泻火中药合剂对其表达的影响

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目的:观察GABAA受体α亚基在性早熟模型大鼠下丘脑中的表达规律,并初步探讨GABAA受体α亚基在性早熟发病机制的作用;通过观察滋阴泻火中药合剂对性早熟大鼠下丘脑GABAA受体α亚基表达的影响,探讨滋阴泻火中药合剂的作用机制,为该药治疗性早熟提供新的科学实验依据。方法:实验共分为两部分,我们首先观察了达那唑诱导的性早熟大鼠下丘脑GABAA受体α1-3亚基mRNA的表达。将雌性SD大鼠随机分为正常组,对照组和模型组。模型组大鼠在出生后第5天给与皮下注射达那唑300μg(溶于250μ1乙醇乙二醇等体积溶液);对照组则注射等体积的乙醇乙二醇混合液;正常组不作任何处理。在前一部分的基础上,我们观察了滋阴泻火中药合剂对性早熟大鼠下丘脑GABAA受体α亚基表达的影响:5日龄雌性SD大鼠分为正常组,模型组,生理盐水组,滋阴泻火中药合剂组(以下简称“中药组”)。后三组在出生后第5天皮下注射达那唑进行造模,正常组不作任何处理;从第15天开始中药组给予滋阴泻火中药合剂灌胃,生理盐水组给予等量生理盐水灌胃,模型组不作其他处理。滋阴泻火中药合剂每毫升含3.3克生药,每天灌胃量为1.29ml/100g体重,至取材时为止。各组实验动物均于生后22天开始观察阴门开启情况;记录每只动物阴门开启的时间。取材时断头处死,迅速取下丘脑-80℃保存,取子宫和卵巢称重,计算子宫和卵巢系数;取血检测雌激素、促性腺激素水平,应用RT-PCR和realtimePCR以及Western Blot观察下丘脑GnRH、GABAA受体α亚基、雌激素α受体以及谷氨酸脱羧酶mRNA的表达变化。结果:实验一1.模型组大鼠阴门开启时间显著早于正常组和对照组(P<0.01),在出生后25天模型组大鼠子宫和卵巢的发育比正常组和对照组显著提前(P<0.05);但在生后32天和44天,三组之间子宫和卵巢的器官系数无显著差异。2.模型组大鼠下丘脑GABAA受体α1和α3亚基mRNA表达水平显著下调,与正常组和对照组相比,有显著差异(P<0.05),而三组动物下丘脑GABAA受体α2亚基mnRNA的表达则无显著差异(P>0.05)。实验二1.生后第22天,模型组大鼠子宫和卵巢的器官系数显著高于正常组(P<0.05),而中药组大鼠子宫和卵巢的器官系数显著低于模型组(P<0.05);模型组和生理盐水组大鼠子宫和卵巢的器官系数无显著差异(P>0.05)。2.模型组大鼠血清E2, LH和FSH水平明显高于正常组和对照组(P<0.01),中药组三种激素水平比模型组和生理盐水组有下降,FSH水平有差异(P<0.05),E2和LH水平差异尤为明显(P<0.01)。3.模型组性早熟大鼠下丘脑GnRH mRNA的表达显著上调,与正常组相比有显著差异(P<0.01);中药组大鼠下丘脑GnRH mRNA表达水平显著下降,与模型组相比有显著差异(P<0.01)。4.模型组大鼠下丘脑GABAA受体α1和α3mRNA表达水平显著下调,与正常组相比有显著差异(P<0.01);中药组大鼠下丘脑GABAA受体α1l和α3mRNA表达水平显著升高,与模型组相比,有显著差异(P<0.01)。而其他四个亚基mRNA的表达在各组之间没有差异(P>0.05)。模型组大鼠下丘脑GABAA受体α1亚基蛋白表达下降,与正常组相比有显著差异(P<0.01);中药组大鼠下丘脑GABAA受体α1蛋白表达水平显著升高,与模型组相比有显著差异(P<0.01)。与此相似,模型组大鼠下丘脑GABAA受体α3亚基蛋白表达下降,与正常组相比有显著差异(P<0.01);中药组大鼠下丘脑GABAA受体03蛋白表达水平显著升高,与模型组相比有显著差异(P<0.01)。5.模型组性早熟大鼠下丘脑ERα mRNA水平显著升高,与正常组相比有显著差异(P<0.05);中药组ERα mRNA表达水平显著降低,与模型组相比,有显著差异(P<0.05)。6.下丘脑GAD65和GAD67mRNA的表达在各组之间无统计学差异(P>0.05)。结论:滋阴泻火中药合剂可以显著缓解雌性性早熟大鼠的性早熟症状;性早熟大鼠下丘脑GnRH mRNA表达显著升高,滋阴泻火中药合剂可以显著下调GnRH mRNA的表达;性早熟大鼠下丘脑ERα受体mRNA表达显著升高,滋阴泻火中药合剂可以显著下调ERα受体mRNA的表达;性早熟大鼠下丘脑GABAA受体α1和α3mRNA和蛋白表达水平显著降低,滋阴泻火中药合剂可以上调GABAA受体α1和α3亚基mRNA和蛋白的表达,进而抑制GnRH的合成释放,延缓性早熟大鼠下丘脑-垂体-性腺轴的启动。
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