【摘 要】
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研究背景冠状动脉粥样硬化心脏病（Coronary artery disease,CAD）是严重危害人类健康的主要心血管疾病。研究证实,血脂代谢紊乱与炎症免疫反应导致的动脉粥样硬化（Arteriosclerosis,AS）是其主要的病因,巨噬细胞作为重要的免疫细胞在血脂代谢及血管炎症免疫反应中扮演的重要角色。巨噬细胞被氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）等危险因素激活,释放众多促炎因子及炎症因子,诱导自
【基金项目】
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国家自然科学基金（青年项目:81900398）；
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研究背景冠状动脉粥样硬化心脏病（Coronary artery disease,CAD）是严重危害人类健康的主要心血管疾病。研究证实,血脂代谢紊乱与炎症免疫反应导致的动脉粥样硬化（Arteriosclerosis,AS）是其主要的病因,巨噬细胞作为重要的免疫细胞在血脂代谢及血管炎症免疫反应中扮演的重要角色。巨噬细胞被氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）等危险因素激活,释放众多促炎因子及炎症因子,诱导自身增殖,从而促进AS的形成及进展。现临床积极降脂治疗仅能降低约30%的主要心血管事件,残余风险仍很高。因此,寻求减少AS残余风险的治疗方法具有重大意义。由于巨噬细胞的炎症反应在AS形成发挥重要作用,调控巨噬细胞的炎症反应有望成为治疗AS的新靶点。磺基转移酶家族胞浆 2B 成员 1（Sulfotransferase family cytosolic 2B Member 1,SULT2B1b）是一种重要的胆固醇磺基转移酶,与细胞内脂质代谢密切相关。本课题组前期研究发现降低SULT2B1b表达能够升高淋巴细胞内肝X受体（Liver X receptor-β,LXR-β）的水平促使细胞的胆固醇流出率升高,细胞内胆固醇含量降低;且发现急性心肌梗死患者淋巴细胞内SULT2B1b的mRNA及蛋白水平均显著高于非CAD患者。上述结果提示淋巴细胞内SULT2B1b的表达水平可能通过调控细胞的脂质代谢及炎症反应来影响AS等进展,但在巨噬细胞内是否能够调控其炎症反应尚未明确,其具体机制也有待进一步研究。近年的研究发现小分子RNA（MicroRNAs,miRNAs）可通过翻译抑制或降解mRNA等方式负性调控生物基因表达,对血脂代谢及巨噬细胞的炎症反应具有调控作用。研究目的本研究通过构建重组腺病毒转染RAW264.7细胞模型,探讨低表达SULT2B1b基因对ox-LDL诱导巨噬细胞增殖和炎症反应的作用,结合低表达SULT2B1b的巨噬细胞的差异表达的miRNAs,从机制上探究SULT2B1b调控ox-LDL诱导下巨噬细胞的炎症反应和增殖的机制,为抗AS提供降脂之外的新的治疗方向。研究方法使用低表达SULT2B1b的腺病毒（Ad-shSULT2B1b）及对照腺病毒（Ad-GFP）转染RAW264.7细胞后予以ox-LDL刺激诱导,使用RT-qPCR、Western Blot、CCK-8、EdU、免疫荧光、RNASeq测序、在线生物信息学数据库预测、双荧光素酶实验、免疫共沉淀、电泳迁移率实验（EMSA）等实验方法,检测低表达SULT2B1b对ox-LDL诱导下的RAW264.7细胞的增殖及IL-6、TNF-α的表达作用,并筛选出低表达SULT2B1b后差异表达的miRNAs,探索miRNAs在SULT2B1b调控ox-LDL诱导下的巨噬细胞的增殖及炎症因子的作用,明确低表达SULT2B1b调控ox-LDL诱导下的巨噬细胞增殖及炎症反应的具体机制。研究结果我们发现:1、降低SULT2B1b的表达既抑制ox-LDL诱导下的RAW264.7细胞的增殖,还能减少IL-6、TNF-α的表达;2、RNASeq测序结果提示低表达SULT2B1b可促使miR-148a-3p表达显著增加,miR-148a-3能增强低表达SULT2B1b对ox-LDL诱导下的RAW264.7细胞的增殖及IL-6、TNF-α的表达的抑制功能;3、IKBKB是miR-148a-3p的直接靶基因,并受其负性调控,低表达SULT2B1b促进miR-148a-3p表达增加,抑制IKKβ、p-P65表达,增加IκB表达,抑制ox-LDL所诱导的NF-κB通路激活。研究结论在巨噬细胞中降低SULT2B1b表达,可增加miR-148a-3p的表达,负性调控IKBKB,减少IKKβ、p-P65表达,促进IκB表达增加,抑制ox-LDL所激活NF-κB通路,下调炎症因子IL-6、TNF-α的表达,以及减弱巨噬细胞的增殖。因此,通过降低巨噬细胞的SULT2B1b表达,可抑制ox-LDL诱导的细胞炎症,这有望成为治疗AS的新途径。
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