【摘 要】
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目的:提取并鉴定人尿源干细胞来源的外泌体(h USCs-Exo)。方法:利用改良的尿液收集装置收集健康成年男性新鲜尿液,采用“一次离心法”从尿液中分离得到人尿源干细胞(h USCs),
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目的:提取并鉴定人尿源干细胞来源的外泌体(h USCs-Exo)。方法:利用改良的尿液收集装置收集健康成年男性新鲜尿液,采用“一次离心法”从尿液中分离得到人尿源干细胞(h USCs),对其进行培养,传代;通过CCK-8法绘制其生长曲线,流式细胞术鉴定其表面标记物,体外定向诱导其向成骨细胞、脂肪细胞分化,分别采用茜素红、Von Kossa和油红O染色进行鉴定;采用改良超高速离心法从h USCs培养上清中提取h USCs-Exo,透射电镜分析其形态、NTA法分析其大小及浓度,蛋白质免疫印迹法(WB)检测其特异性蛋白CD9、CD63和HSP70的表达。结果:h USCs培养3-5天后开始贴壁生长,细胞在原代时呈“铺路石”样,在第一代和第二代时呈“米粒”样,传至第三代后逐渐呈“纺锤形”或“梭形”;经CCK-8法测定h USCs呈现典型的“S”形生长曲线;流式细胞技术显示:h USCs阳性表达间充质干细胞特异的表面标志物CD44、CD73、CD90和CD105,不表达CD19、CD34、C D45CD11b和HLA-DR,表明h USCs符合间充质干细胞的特征;同时h USCs在体外经成骨、成脂诱导培养基的诱导培养后,h USCs成功分化为成骨细胞、脂肪细胞。经过超速离心,从h USCs的条件培养基中提取h USCs-Exo,经透射电镜观察呈圆形或者椭圆形膜性囊泡样,形似“茶托”,大小主要集中在64-141nm之间,表达蛋白CD9、CD63和HSP70。结论:成功分离、培养了人尿源干细胞,并对其来源的外泌体进行了提取和鉴定。
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