川芎嗪和葛根素配伍对大鼠局灶性脑缺血后神经细胞凋亡及Cyt-c、caspase-3表达的影响

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目的:研究川芎嗪和葛根素配伍对大鼠局灶性脑缺血后神经细胞凋亡及Cyt-C、caspase-3表达的影响,探讨川芎嗪和葛根素配伍对脑缺血损伤的保护作用。  方法:选用清洁级健康SD大鼠60只,按数字随机分为5组:假手术组、模型组、川芎嗪+葛根素低剂量组、川芎嗪+葛根素中剂量组、川芎嗪+葛根素高剂量组,每组12只。采用线栓法制作大鼠中动脉闭塞局灶性脑缺血模型,在造模成功后0、6 h时点分别予腹腔注射注入相应药物。其中,川芎嗪+葛根素低剂量组注入川芎嗪20 mg/kg+葛根素20mg/kg,川芎嗪+葛根素中剂量组注入川芎嗪50mg/kg+葛根素50mg/kg,川芎嗪+葛根素高剂量组注入川芎嗪80mg/kg+葛根素80mg/kg。实验动物于缺血后24h进行神经功能评分,HE染色观察梗死病理学改变,Tunnel染色检测神经细胞凋亡,Western blot技术检测Cyt-C、Caspase-3表达水平。  结果:  1.神经功能评分:假手术组神经功能评分为(0.17±0.41),模型组为(3.87±0.52),川芎嗪+葛根素低剂量组为(2.91±0.41),川芎嗪+葛根素中剂量组为(2.03±0.41),川芎嗪+葛根素高剂量组为(1.17±0.52);与假手术组相比较,模型组神经功能评分显著增加;与模型组相比,川芎嗪+葛根素低、中、高剂量组的神经功能评分显著减少;且随着剂量的增加,其神经功能评分减少越加显著。  2.HE染色脑组织病理学变化:假手术组中未见梗死改变,神经细胞形态正常,胞膜、核膜清晰,核仁明显;模型组及川芎嗪+葛根素低、中、高剂量组可见稳定梗死灶,皮质梗死中心区神经细胞脱失明显,残存细胞多无完整的细胞结构,细胞核固缩深染,核仁消失。梗死区周围神经细胞数目减少,且肿胀、坏死、脱失,分布不均匀,细胞周围及间隙增宽,水肿明显。川芎嗪+葛根素低、中、高剂量组梗死灶中心神经细胞脱失亦较明显,较缺血再灌注组无明显差别,缺血半暗带内细胞形态较缺血组规则,脑组织损害程度明显减轻,且随着剂量的增加,其脑组织损害程度减轻更为明显。  3.Tunnel染色及光镜下凋亡细胞计数:假手术组凋亡细胞数为(0.91±0.65),模型组为(17.98±1.01),川芎嗪+葛根素低剂量组为(15.72±1.85),川芎嗪+葛根素中剂量组为(13.22±1.35),川芎嗪+葛根素高剂量组为(11.12±1.12)。与假手术组相比,模型组凋亡细胞明显增多;与模型组比较,川芎嗪+葛根素低、中、高剂量组的凋亡细胞计数明显减少,且随着剂量的增加,凋亡细胞计数减少更为显著。  4.Western blot检测Cyt-C、caspase-3蛋白表达:假手术组的Cyt-C、caspase-3蛋白表达量分别为(1.22±0.82)、(2.14±0.14),模型组为(4.58±0.63)、(13.82±0.27),川芎嗪+葛根素低剂量组为(3.46±0.10)、(8.97±0.33),川芎嗪+葛根素中剂量组为(2.57±0.53)、(6.63±0.62),川芎嗪+葛根素高剂量组为(1.49±0.12)、(5.10±0.36)。与假手术组相比较,模型组的Cyt-C、caspase-3蛋白表达明显增高;与模型组相比,川芎嗪+葛根素低、中、高剂量组的Cyt-C、caspase-3蛋白表达均显著减少;且随着剂量的增加,Cyt-C、caspase-3蛋白表达减少越加显著。  结论:  1、川芎嗪和葛根素配伍对脑缺血损伤具有明显的保护作用。  2、川芎嗪和葛根素配伍对脑缺血损伤的保护作用存在量效关系。  3、川芎嗪和葛根素配伍可能通过下调 Cyt-C、caspase-3表达,减少细胞凋亡而发挥对脑缺血损伤的保护作用。
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