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乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)属于黄病毒科黄病毒属(Flavivirus),其基因组为11kb左右的单股正链RNA。乙型脑炎的治疗没有特殊的有效方法,因此,在分子水平上阐明JEV的致病机制,进而开发特殊有效的乙型脑炎治疗药物,是近年来国内外乙JEV研究的热点和前沿。内质网是真核细胞中一种重要的亚细胞器。内质网内蛋白质未完全折叠或折叠错误等内质网压力能引起从内质网到胞浆和胞核的信号传导途径即内质网应激反应。减轻内质网压力、利于细胞生存的内质网应激反应包含非折叠蛋白质反应(unfolded protein response,UPR)。当内质网内的非折叠或错误折叠蛋白积累时,分子伴侣GRP78(glucose-regulated protein 78,也称Bi P)与内质网的三种跨膜蛋白ATF6(activating transcription factor 6)、IRE1(inositol-requiringenzyme 1)和PERK(PER-like ER kinase)解离,进而激活UPR的三条信号通路(ATF6,IRE1和PERK信号通路)。通过ATF6、IRE1和PERK信号通路的协同作用,UPR使得累积在内质网内的非折叠或错误折叠蛋白减少,使细胞能够耐受及生存。但是,当出现过强或者持久内质网应激UPR通过以下三种途径激活细胞凋亡和炎症反应(1)ATF4/ATF6/XBP1s凋亡途径;(2)IRE1/TRAF2凋亡和炎症途径;(3)Bax/Bak/Bap/Ca2+凋亡和炎症途径。本研究发现:乙型脑炎病毒SA14-14-2株诱导BHK-21细胞内GRP78、ATF4、CHOP mRNA和/或蛋白质水平升高,XBP1 mRNA和ATF6蛋白拼接,表明JEV感染激活内质网应激反应。SA14-14-2也诱导BHK-21细胞病变,导致细胞活力降低和凋亡细胞比例增加,表明JEV感染诱导细胞发生凋亡。同时,RNA-seq技术也同样证明乙型脑炎病毒SA14-14-2株和内质网应激反应诱导物Tunicamycin处理的BHK-21细胞均比模拟感染的细胞GRP78、ATF4等基因mRNA丰度更高,且差异基因能够富集到内质网应激信号通路上。IRE1抑制剂3,5-Dibromosalicylaldehyde、JNK激酶抑制剂SP600125在不影响病毒复制的前提下,抑制SA14-14-2感染BHK-21细胞的内质网应激反应并降低凋亡程度,而内质网应激反应诱导物Tunicamycin诱导BHK-21细胞凋亡。上述结果在国际上我首次证明乙脑病毒经内质网IRE1/JNK信号通路诱导细胞凋亡,在分子水平上揭示内质网应激反应在乙脑病毒致病性中发挥作用。