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内生菌是植物微生态系统中不可或缺的重要部分,不仅种类繁多,生物学功能也丰富多样,已成为国内外研究的一个热点。华石斛(Dendrobium sinense)为海南特有种,生长在海拔1500m的热带雨林中,具有较强的药用价值,是当地黎族的传统珍稀药材。本研究对华石斛内生菌进行初步研究,并测试其抑菌活性,为华石斛内生菌的开发利用奠定坚实基础。研究结果如下:(1)华石斛内生菌的分离本研究采用5种分离培养基从华石斛中分离内生真菌179株,其中不同组织分离得的内生真菌数量为根26株、茎45株、叶108株。5种分离培养基分离得到的华石斛内生真菌菌种数:1/5PDA<FIM<水琼脂培养基(Ag)<天然培养基(PE)<PDA。采用3种分离培养基从华石斛中分离得内生细菌165株。其中不同组织分离的内生细菌数量为根13株、叶50株、茎102株。3种分离培养基培养得到的内生细菌菌种数:水琼脂培养基(Ag)<高氏1号培养基(G)<牛肉膏蛋白胨培养基(NA)。(2)华石斛内生菌的鉴定对内生真菌进行ITS序列测定分析,结果显示,179株华石斛内生真菌分属于22个已知属,45种,优势种群为Phyllosticta capitalensis。根8属12种,优势种群为Hypoxylon investiens;茎10属21种,优势种群为Phyllosticta capitalensis;叶11属23种,优势种群为Phyllosticta capitalensis。对内生细菌进行16SrDNA序列测定分析,结果显示,165株华石斛内生细菌分属于7个已知属,32种,优势菌属为Staphylococcussp。根4属8种,优势种群为Bacillus amyloliquefaciens;叶 5 属 25 种,优势种群为Staphylococcus epidermidis;茎 6 属 16 种,优势种群为 Bacillus amyloliquefaciens、Staphylococcus aureus、Staphylococcus warneri。(3)拮抗性内生菌株的筛选本研究通过抑菌圈法和生长抑制率法对内生菌进行抑菌活性测试,得到具有明显抑制圈的内生菌55株,其中内生真菌2株,分别为Pestalotiopsis uvicola和Talaromyces verruculosus;还包括53株内生细菌,分属4属20种。其中有25株(2属5种)内生细菌对6种供试病原菌均具有拮抗作用,这5种分别为:Bacillus amyloliquefaciens、Bacillus subtilis、Bacillus velezensis、Staphylococcus petrasii和Staphylococcus warneri。(4)华石斛内生菌发酵液抑菌活性选择对黑曲霉和西瓜枯萎病菌抑菌性较强的2种华石斛内生真菌Pestalotiopsis uvicola 和Talaromyces verruculosus发酵液及菌丝的乙酸乙酯提取物进行抑菌活性测定,发现发酵液粗提物的抑菌作用比菌丝粗提物强,其中内生真菌Pestalotiopsis uvicola的发酵液粗提物对11种供试病原菌均具有一定的抑菌作用。对5种具有广谱抑菌活性的内生细菌B.amyloliquefaciens、B.subtilis、B.velezensis、S.petrasii和S.warneri的发酵液乙酸乙酯粗提物进行抑菌活性测试,结果表明:S.warner和S.petrasii 的粗提物对病原菌均具有较好的抑制作用,并且在活体抑菌性检测中对辣椒炭疽菌具有较强的作用。