高效液相色谱荧光检测应用于唾液酸分析研究

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唾液酸是广泛存在于动物体内的重要单糖,由于经常位于糖链的末端,因而参与众多生理生化反应。研究者们已经发现了50多种唾液酸,也了解了部分其参与的生理病理过程。但至今,唾液酸在这些过程中的具体职责依然不为人知。唾液酸的种类以及浓度对其生物功能均有影响,因此获得能够对它们进行准确快速的定量分析的方法具有很重要的价值和生物意义。常用的唾液酸检测方法有光谱分析法、气象色谱法、液相色谱法、质谱法和电流法等等,近年来高效液相色谱-荧光检测法因为具有分离快、灵敏度高和样品消耗量低等特点而受到越来越多的关注。本文主要研究了基于高效液相色谱良好的分离性能、荧光检测的高灵敏度而建立的分析方法。本方法以1,2-diamino-4,5-methylenedioxybenzene(DMB)为柱前衍生试剂,与唾液酸进行反应得到具有荧光特性的衍生物,采用高效液相色谱分离,在激发波长为373纳米、吸收波长为448纳米条件下进行激光诱导荧光检测。通过对反应参数和检测结果进行分析,调整反应温度、时间以及荧光试剂浓度等一系列条件而获得最佳衍生体系。在此基础上以峰面积定量得到唾液酸各自的衍生物浓度与峰面积的回归方程、线性范围和检测限,并将此检测体系应用于含有单种唾液酸的大鼠血清和含有多种唾液酸的小鼠血清研究。
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