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在我国，胃癌是发病率及死亡率最高的恶性肿瘤之一。大部分胃癌患者预后较差。目前治疗以手术、化疗为主，但复发、转移率仍较高，晚期疗效差，须积极探讨新的治疗方法。 Galα(1，3)Gal为一碳水化合物表位，是位于猪及鼠细胞表面能够为人体内预存的天然抗体识别的主要异种抗原。它是在α1，3-半乳糖基转移酶(α1，3GT)催化下，通过把尿苷二磷酸半乳糖上的糖基转移到糖脂和糖蛋白链上的N-乙酰葡萄糖胺残基上形成的，末端α-半乳糖残基是天然抗体特异识别位点，Galα(1，3)Gal在猪、鼠及新世界猴等动物细胞上表达，而在人、猿及古世界猴中由于α1，3-半乳糖基转移酶失活，细胞膜表面没有该表位的表达，革兰氏阴性菌的脂多糖类和荚膜多糖上含有Galα(1，3)Gal结构，人出生几个月后，这些细菌尤其是大肠杆菌在胃肠道刺激人体产生针对Galα(1，3)Gal的抗体。本研究旨在克隆小鼠α1，3-半乳糖基转移酶基因，构建其真核表达载体pCDNA3.1/V5-HisA-α1，3GT，通过脂质体转染胃癌GC9811细胞，使肿瘤细胞表达α-gal表位，利用人体内的天然抗体与该表位产生超急性排斥反应，对癌细胞实行杀伤。主要实验方法及结果包括： 1．由经石蜡油刺激的BALb/c小鼠腹腔巨噬细胞提取RNA，通过 第四军医大学硕士学位论文 1．由经石蜡油刺激的BALb八 小鼠腹腔巨噬细胞提取RNA，通过 RT－PCR方法扩增出一长1221hP的序列，经测序得到证实。 2．通过定向克隆方法，将目的基因亚克隆至真核表达载体 PcDNA3．1／V5－HISA，经双酶切鉴定。 3．使用脂质体介导的方法转染胃癌GC9811细胞，经G418筛选，得 到不定转染的细胞株 GC98，3GT，RT－PCR证实 GC98，3GT中 mRNA的表达。 4．MTT 比色试验显示 GC98－al，3GT细胞的增殖速度低于亲本 GC98细胞。 5．间接荧光兔疫组化提示 GC98llul，3GT细胞膜表面有 Gala （l，3）Gal表达。 6．流式细胞仪检狈证实转染 pCDNA3．1／VS－HisA al，3GT 的细胞97．7％带有荧光，明显高于空载体组（0．4％）及亲本（5．5％）细胞，提示转染pCDNA3．1／VS－HisA al，3GT的细胞高表达 Gal（l，3）Gal。 7．人体血清杀伤实验：10％－30％的GC98llal，3GT癌细胞被杀伤，与亲本细胞相比，具有统计学意义。随着血清浓度的增加，血清对转染了al，3－半乳糖基转移酶基因的癌细胞杀伤作用增强，血清对空载体组及对照组细胞没有明显的杀伤作用。 以上实验表明：人体血清对转染QI，3－半乳糖基转移酶基因并表达Gain（1，3）Gal表位的 GCgsll 细胞具有杀伤作用。1 小鼠 al，3－半乳糖基转移酶基因引入人的胃癌细胞，使其表达Gala（1，3）Gal，利用人体血清通过超急性排斥反应对癌细胞杀伤，为肿瘤基因治疗提供了新的思路和方法。