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我国茶树花资源丰富,但利用率低。皂苷是茶树花中的重要功能成分,近年来,茶树花皂苷的多种生物活性逐渐受到关注,但关于抗肿瘤效果的研究较少。卵巢癌是全球范围内致死率最高的妇科恶性肿瘤,也是女性癌症致死的第五大原因。已有研究报道了不同植物来源的多种皂苷物质对于卵巢癌具有较好的抑制作用。本文研究了茶树花皂苷对卵巢癌及其干细胞的作用与机理,主要研究结果如下:1、采用热水浸提、大孔树脂纯化和半制备型高效液相色谱分离的方法,结合UPLC-Q-TOF/MS/MS检测分析,从白叶1号茶树花中提取得到以Floratheasaponin A和Floratheasaponin D为主成分的茶树花皂苷复合物BTFS 3。研究发现BTFS 3对人卵巢癌细胞A2780/CP70体外增殖具有显著的抑制作用。细胞活力检测、细胞克隆形成实验与Western blot分析结果表明,BTFS 3能选择性地抑制A2780/CP70细胞活力,减少细胞克隆形成,并降低增殖细胞核抗原PNCA的蛋白表达量。2、BTFS 3可诱导A2780/CP70细胞发生S期阻滞。通过流式细胞术、活性氧ROS检测与Western blot分析,发现BTFS 3可上调p21和Cyclin E1蛋白,下调CyclinA2、CDK2、Cdc25A蛋白,抑制Cyclin E1/CDK2和Cyclin A2/CDK2复合体形成,从而诱导细胞发生S期阻滞。此外,BTFS 3还可促进ROS生成,诱导DNA损伤,通过ATM-Chk2-Cdc25A-CDK2信号通路参与S期阻滞。3、BTFS 3可通过激活死亡受体途径和线粒体途径诱导A2780/CP70细胞凋亡。Hoechst 33342染色法、线粒体膜电位测定、流式细胞术、Caspase酶活力检测与Western blot分析结果表明,BTFS 3能够上调死亡受体相关蛋白Fas、DR5和FADD表达水平,提高Caspase-8酶活力,激活细胞凋亡的死亡受体途径;也可以增加Bcl-2家族促凋亡/抗凋亡蛋白比值,提高Caspase-9酶活力,激活细胞凋亡的线粒体途径。同时,BTFS 3诱导细胞凋亡的作用与AKT-MDM2-p53信号通路相关。4、BTFS 3对卵巢癌细胞A2780/CP70的干性细胞(Ovarian cancer stem like cells,OCSLCs)具有抑制增殖生长与减弱干性特征的作用,该作用同G0/G1期阻滞和Wnt/β-catenin信号通路抑制相关。采用无血清悬浮培养法富集获得到OCSLCs,通过MTS实验、细胞克隆和肿瘤球形成实验、流式细胞术检测干细胞标记物ALDH活性及Western blot分析,结果发现BTFS 3能降低OCSLCs的细胞活力、抑制细胞克隆与肿瘤球形成能力、减少ALDH~+细胞比例,下调干性相关蛋白Oct-4和Nanog表达量,并诱导细胞发生G0/G1期阻滞。此外,BTFS 3可上调p-β-catenin蛋白表达,下调p-AKT、p-GSK-3β、β-catenin和c-Myc蛋白表达,通过抑制Wnt/β-catenin信号通路激活从而影响OCSLCs。