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目的：为提高非病毒载体转染细胞后的基因表达水平并延长表达时间,并为骨髓间充质干细胞(MSC)生长创造更好的环境,以期用于软骨损伤的体内再生治疗。方法：1、合成普鲁兰糖-精胺,与DNA孵育制备普鲁兰糖-精胺/DNA复合物,考察该复合物的粒径与电位。2、考察基因复合物在不同细胞上的转染效果,利用阴离子化明胶构建反向转染体系,比较反向转染方法与常规转染方法的差异3、在体外选择PET无纺纤维与胶原海绵作为支架,结合反向转染构建了反向三维转染体系,在MSC上考察报告基因转染效果与转染编码TGFβ-1的DNA后诱导MSC向软骨方向分化的能力。4、以可降解的壳聚糖温敏凝胶与明胶海绵作为三维支架,携载以普鲁兰糖-精胺转染TGFβ-1基因的MSC,考察其软骨修复的能力。结果：普鲁兰糖-精胺/DNA复合物可以成功转染MSC。在血清存在情况下,反向转染方法相比常规方法可以产生更高的基因表达。阴离子化明胶的带电性与反向转染体系的转染效率密切相关,所带负电荷的多少可以影响到基因复合物的释放过程,以及血清蛋白在表面上的吸附量。不同的转染方法可能影响到细胞对基因复合物的摄取途径,摄取的改变与载体类别和细胞类型都有关系。培养在三维支架上的MSC转染后相比二维环境下可以保持更长期的基因表达,在PET无纺纤维上的基因表达水平也更高。以壳聚糖温敏凝胶为支架携载转染pTGFβ-1的MSC治疗组与未处理损伤组修复效果相似；以含有TGFβ-1基因的明胶海绵或经过TGFβ-1基因重组的MSC进行修复,具有一定的软骨修复效果。结论：血清的加入对反向转染体系的基因转染效果不产生明显影响,克服了常规转染时血清对转染效率的负面影响。将反向转染与三维支架结合后更有利于细胞的生长,使MSC在体外保持长期的基因表达。以明胶海绵携载转染pTGFβ-1后的MSC体内移植后可促进大鼠膝关节软骨损伤修复。