我国西北地区羊布鲁氏菌分子流行病学及抗原表位多肽的筛选

来源 :中国农业科学院 | 被引量 : 2次 | 上传用户:goodyoujun
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布鲁氏菌病(Brucellosis)是由兼性细胞内寄生的布鲁氏菌(Brucella)引起的人兽共患烈性传染病,近年来在我国大部分地区再次流行,引起了严重的经济损失和公共卫生问题。本论文旨在分析我国西北地区羊布鲁氏菌分子流行病学,了解布鲁氏菌优势菌株及其菌株基因特征,追溯流行菌株的来源和变异情况;根据流行菌株基因组特征,选择保守的免疫抗原蛋白,筛选有针对性的抗原表位多肽。  从我国西北新疆、青海、甘肃和内蒙古四省区一些地区采集羊和牦牛疑似感染布鲁氏菌病流产胎儿的脾脏样本480份,共分离鉴定布鲁氏菌菌株66株,其中马耳他布鲁氏菌3型58株,马耳他布鲁氏菌1型1株,流产布鲁氏菌1型2株,流产布鲁氏菌3型3株和猪布鲁氏菌3型2株;用MLVA和MLST基因分析技术,对66株布鲁氏菌菌株进行分子流行病学研究发现,66株布鲁氏菌分离株中包含46个MLVA16基因型,37株菌株拥有独立特有的基因型,有一株为新的基因型(基因型369),其中基因型116(n=49)和ST8(n=53)为优势的基因型。MLVA16分析66株分离株的亨特-加斯顿多样化指数(HGDI)表明,菌株间多样化水平为0979,以MLVA11进行分子流行病学分析表明,我国马耳他布鲁氏菌流行菌株的主要基因型为116,分离株MLVA16的鉴定分析有助于深入了解西北地区动物布鲁氏菌病流行情况。  首次对甘肃马耳他布鲁氏菌流行株分析发现,其流行菌株的种类、基因型无规律性。分子流行病学比较表明,人感染布鲁氏菌病主要来源于羊。甘肃庆阳地区2011-2015年间布鲁氏菌血清流行情况分析表明,布鲁氏菌年流行率在004%-475%之间,8个县区年均流行率在0%-996%之间,布鲁氏菌发病呈现上升趋势,差异明显;分离菌株分子流行病学结果表明,甘肃庆阳地区羊布鲁氏菌不仅有本地区周围的优势流行菌株,而且也存在外来菌株的混合感染。  对分离于甘肃和青海的2株(羊源和牦牛源各1株)马耳他布鲁氏菌代表株全基因组测序分析,结果显示全基因组相对保守,长度为33Mb,有两个环状染色体,但基因组上也存在数量不等的特异基因。应用树突状细胞筛选布鲁氏菌种间保守的Omp16和L7/L12免疫蛋白潜在的抗原表位多肽,小鼠免疫评价结果表明omp16-1和L7/L12-4为T细胞抗原表位多肽,能刺激细胞和免疫动物发挥细胞免疫功能;omp16-5能够与布鲁氏菌阳性血清发生强烈反应,也能发挥体液免疫功能。  总之,我国西北地区羊主要流行马耳他布鲁氏菌3型菌株,优势基因型为116(MLVA11)和ST8(MLST),布鲁氏菌菌株主要来自于东地中海布鲁氏菌群,基因组保守度高,应用DC能有效的筛选表位多肽抗原,并从Omp16和L7/L12蛋白上获得了理想的表位多肽。
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