论文部分内容阅读
[目的]观察胰高血糖素样肽-1类似物(利拉鲁肽)对体外培养人成骨细胞增殖及Wnt信号通路相关基因表达的影响,初步研究胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对成骨细胞的作用及其机制,探索GLP-1与骨代谢的关系,为GLP-1应用于糖尿病及骨质疏松的治疗提供新的思路。[方法]1.在体外对人成骨细胞进行原代培养,倒置相差显微镜下观察成骨细胞形态,行骨钙素免疫组化染色对成骨细胞进行鉴定。2.向体外培养的人成骨细胞中,分别以不同浓度的GLP-1类似物(Omo1/L.10-7mol/L.10-8mol/L.10-9mol/L)作用,24h后采用Cell Counting Kit-8(CCK-8)比色法检测成骨细胞增殖率。3.将不同浓度的GLP-1类似物(Omol/L.10-7mol/L.10-8mol/L、10-9mo1/L)作用于人成骨细胞,24h后通过实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测Wnt信号通路相关基因Wnt-3a、LRP-5、β-catenin mRNA的表达。4.统计学方法：采用SPSSl3.0统计分析软件包处理分析数据,实验数据用均数±标准差(x±s)表示,并采用单因素方差分析,组间比较采用LSD-t法,P<0.05为差异有统计学意义。[结果]1.倒置相差显微镜下观察,原代培养的人成骨细胞呈长梭形、星形或不规则多边形。骨钙素免疫组化染色后胞浆可见棕黄色颗粒状物质。2.不同浓度的GLP-1类似物(Omol/L.10-7.mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L)作用于人成骨细胞24h后,实验各组成骨细胞0D值均增高,且随着GLP-1给药浓度的降低,成骨细胞OD值逐渐增高。实验组与对照组比较,实验组组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。3.采用RT-PCR法检测Wnt-3a、LRP-5、β-catenin mRNA的表达,结果显示,低浓度GLP-1(10-9mol/L)上调人成骨细胞中Wnt-3a、LRP-5、β-catenin mRNA的表达,高浓度GLP-1(10-7mol/L、10-8mol/L)下调人成骨细胞中Wnt-3a、 LRP-5、β-catenin mRNA的表达。实验组与对照组比较,实验组组间比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。[结论]1.胰高血糖素样肽-1(GLP-1)能促进人成骨细胞的增殖。2.低浓度胰高血糖素样肽-1(GLP-1)上调wnt-3a、LRP-5、β-catenin mRNA的表达,可能通过Wnt信号通路参与成骨细胞增殖调控过程。3.高浓度胰高血糖素样肽-1(GLP-1)下调Wnt-3a、LRP-5、β-catenin mRNA的表达,可能通过其他未知通路促进成骨细胞的骨形成过程。