目的:探索利用重度联合免疫缺陷小鼠构建免疫系统人源化小鼠模型,评估人免疫细胞在小鼠体内的表达水平,分析影响模型构建的因素,建立相应的技术标准和规范化操作流程。进一步构建前列腺癌免疫系统人源化小鼠模型并观察模型中肿瘤生长情况,以及肿瘤微环境中免疫细胞浸润特点并进行量化分析,以期为前列腺癌的免疫治疗提供理想的临床前动物模型。方法:利用Ficoll密度梯度离心法提取健康献血者外周血中的单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells,PBMC）,并确保其活性和纯度。将分离的PBMC通过尾静脉注射入重度联合免疫缺陷小鼠NPG/B-NDG B2m小鼠体内。在重建3周后,通过剪鼠尾来收集小鼠的外周血,并从中分离单个核细胞,使用流式细胞术监测小鼠外周血单个核细胞中人CD45+CD3+免疫细胞的占比,以大于25%为标准确定人源化模型重建成功。重建成功后,持续进行流式细胞术检测分析并在小鼠濒死时处死,收集小鼠心、肝、脾、肺、肠以及骨髓等脏器,使用免疫组化、免疫荧光等分析小鼠各器官中人CD45+、CD4+T细胞以及CD8+T细胞的浸润情况,以及免疫系统的分布特点。同时,采用同一供体在不同重度联合免疫缺陷小鼠品系中进行免疫重建,以及使用同一品系小鼠选择不同的供体进行免疫重建,以比较不同品系小鼠、不同供体等对模型免疫重建效果的影响。进一步构建前列腺癌免疫系统人源化模型,首先利用免疫组化及Western blot检测免疫检查点PD-L1在4种常见的人前列腺癌细胞系（22RV1、PC3、C42、LNCa P）中的表达水平,并在重建成功的人源化小鼠模型中皮下接种高表达PD-L1的人前列腺癌细胞系,持续监测肿瘤的生长速度并与未重建的小鼠体内前列腺癌的生长速度进行比较;待肿瘤长至一定体积后,CO2窒息处死小鼠并收集肿瘤,然后利用免疫荧光分析肿瘤组织中人免疫细胞的分布特点,为后续制定免疫治疗策略提供参考。结果:成功分离了高纯度（>95%）、高活率（>95%）的人PBMC。移植重度联合免疫缺陷小鼠3周时,小鼠外周血中人CD45+CD3+T细胞>25%,标志着免疫系统人源化小鼠模型构建成功。流式细胞术动态监测结果显示,人源化小鼠重建水平随时间推移逐步上升,在重建第6周达到77.4%～86.7%。进一步分析结果显示,重建小鼠的心、肝、脾、肠、肺及骨髓中均有人免疫细胞的浸润,说明重建的人免疫系统能够遍及小鼠全身,其中以脾脏重建水平最高。比较发现,同一品系小鼠中不同供体重建水平存在差异,而同一供体在不同品系小鼠中重建效果也不尽相同。检测发现前列腺癌细胞系22RV1中PD-L1高表达,将其植入人源化小鼠后,肿瘤内免疫细胞浸润较少,肿瘤的边缘区域与中心区域只有少量免疫细胞的浸润,这表明前列腺癌是一种“冷”肿瘤,对免疫单药治疗效果有限,可能需要进行联合治疗以改善前列腺癌的免疫治疗效果。结论:成功构建了免疫系统人源化小鼠模型并进行鉴定,并在该模型上移植人前列腺癌肿瘤,为后续免疫治疗研究提供了良好的临床前模型。