人脐带间充质干细胞的3D培养填充物的构建

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【目的】  研究3-D培养的脐带间充质干细胞在培养过程中细胞因子的分泌情况及其材料特性,并通过小鼠填充实验探究其作为一种软组织填充材料的可行性。  【方法】  人脐带间充质干细胞通过产妇剖宫产手术后的废弃脐带经分离出胶状间充质(即华尔通胶组织)并在体外培养得到。我们在细胞培养的过程中通过加入抗坏血酸,达到使细胞重层化培养的目的。收集不同的培养时间节点时细胞生长因子相关mRNA的样本(单层培养至50%融合、完全融合、3-D培养后1d、3d、7d、14d)。当细胞3-D培养到30天的时候,将细胞薄片制成正常组和冻干组,通过将其各填充于小鼠背部皮下组织中,6 个月后行组织学观察。  【结果】  与单层培养的HuMSCs对比,随着3-D培养时间的延长,HuMSCs会表达更高水平的与创伤愈合相关的细胞因子(在基因水平)如血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、类胰岛素生长因子(IFG-1)、肝细胞生长因子(HGF)、角质形成细胞生长因子(KGF)、和血小板源性生长因子(PDGF)。动物实验表明,正常活体3D培养的HuMSCs组织薄片在填充6个月后,通过HE染色,可在小鼠鼠背皮下组织观察到大量细胞堆积。  【结论】  人脐带间充质干细胞组织经过3-D培养形成的组织薄片能自分泌大量的细胞外基质形成3D结构和及分泌更多的各类细胞生长因子,有希望成为理想的新型软组织注射填充材料。
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