论文部分内容阅读
研究背景与目的前列腺癌属于对中老年男性的健康具有严重损害的一大恶性肿瘤,属于全世界最常见的男性癌症之一。全球2018年的癌症统计数据表明,全世界的185个国家里有105个男性发病首位的癌症为前列腺癌,在中国,前列腺癌男性发病率位于第6位。虽然我国前列腺癌发病率仍处于较低水平,但近些年已呈显著上升趋势。因为人口老龄化、生活与饮食习惯的变化,该病目前在国内的发病情况十分严峻。所以,针对前列腺癌持续提高的发病率与东西方患病群体特点的显著不同,依据分子视角研究对前列腺癌发病产生影响的重要因子,分析能够合理对前列腺癌病人预后进行预测的分子标记物,研究其对于前列腺癌发生发展的信号通路的作用也更加关键。TRIM26属于超大蛋白家族TRIM家族（The tripartite motif,TRIM）之一,具备的蛋白结构里N端存在TRIM家族独有的RBC（RING、B box和Coiled-coil结构域）结构,C端具备特异性识别底物蛋白和底物蛋白结合的PRY-SPRY结构。TRIM蛋白家族除了可以让机体具备一般生理功能,也关系到各类疾病体系的调控作用,涉及到细胞分化,发育,增殖,凋亡,信号转导,转录调控,炎症免疫等。现在针对TRIM26的探索大部分是有关抗病毒先天免疫作用,分析TRIM26对肿瘤具有的影响涉猎不多。本研究阐述了TRIM26在前列腺癌细胞增殖中的作用和机制,为前列腺癌分子靶向治疗提供一个可能的靶标。研究方法（1）利用Western Blot检测前列腺癌细胞中TRIM26的表达水平。（2）利用细胞迁移实验测定PC3与WPMY-1细胞的迁移能力。（3）利用细胞划痕实验测定PC3与WPMY-1细胞的愈合修复能力。（4）利用细胞集落形成实验测定PC3与WPMY-1细胞形成集落的能力。（5）利用EdU增殖实验测定PC3与WPMY-1细胞的增殖能力。（6）利用Western Blot检测EMT有关蛋白表达水平。（7）利用Western Blot检测Akt/mTOR信号通路有关蛋白表达水平。（8）利用Western Blot检测经S14161处理后细胞的迁移能力以及Akt/mTOR信号通路有关蛋白表达水平。实验结果（1）通过Western Blot分析发现前列腺癌细胞里的TRIM26呈现高表达。（2）过表达TRIM26有利于前列腺癌细胞的增殖,敲低TRIM26能够抑制增殖。（3）过表达TRIM26促进前列腺癌细胞的愈合修复能力。（4）过表达TRIM26有利于前列腺癌细胞的集落形成,敲低TRIM26会阻碍集落形成。（5）过表达TRIM26会提高前列腺癌细胞的增殖能力,敲低TRIM26会减弱增殖能力。（6）过表达TRIM26下调前列腺癌细胞中E-cadherin的表达,而相应的促进N-cadherin和Vimentin的表达,但是在敲低TRIM26后,这些蛋白的表达水平呈相反改变。这些结果提示TRIM26有可能促进前列腺癌细胞的上皮间质转化（EMT）。（7）通过Western Blot分析发现过表达TRIM26,在前列腺癌细胞中Akt/mTOR蛋白磷酸化激活水平上升,敲低TRIM26在前列腺癌细胞中Akt/mTOR磷酸化水平下降,提示TRIM26能激活Akt/mTOR信号通路。（8）通过Western Blot和细胞迁移实验分析发现,小分子抑制剂S14161可能通过抑制Akt/mTOR信号通路的激活,从而抑制TRIM26对前列腺癌细胞的迁移能力。结论（1）过表达TRIM26会让前列腺癌细胞进一步发生迁移与增殖,会提高愈合修复水平和集落形成水平;而沉默TRIM26表达会对上述环节产生阻碍作用。（2）TRIM26能促进前列腺癌细胞的上皮间质转化。（3）TRIM26或许是因为能够激活Akt/mTOR信号通路才能对前列腺癌细胞产生促进增殖的影响。（4）S14161可抑制TRIM26对前列腺癌细胞的迁移能力。