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第一章宫内缺氧对胎鼠发育的影响目的建立宫内缺氧模型,观察宫内缺氧对胎鼠发育的影响,重点了解对胎鼠肺发育的影响。方法1.动物模型的制备及实验分组通过降低母鼠吸入氧浓度至10.5±1.0%,每天持续缺氧8小时,建立宫内缺氧的模型。实验分组为:空气对照组,缺氧2天组,缺氧6天组和缺氧10天组。于孕21天剖宫后对胎鼠进行相关检查。2.一般情况相关检查记录孕鼠体重、胎鼠体重、胎鼠个数、存活率、胎心(右心室/左心室+室间隔即RV/LV+S)等。3.胎盘组织病理学检查留取空气对照组及各缺氧对照组胎盘连同脐带及血管两例,选择标准是该组重量最大和最小者,进行病理学相关检查。4.肺组织相关检查所有胎鼠进行肺湿重称量,取部分胎肺左叶作HE染色、辐射状肺泡计数(RAC)、肺小动脉外径、管壁厚度、管壁厚度/肺小动脉外径(WT%)、血管总面积、管壁面积、管壁面积/总面积(WA%)检测。5.统计学分析试验数据以均数±标准差表示,多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)及SNK-q检验。p＜0.05认为有统计学意义。结果1.胎鼠存活率随着缺氧时间的延长动物的存活率降低(p＜0.01)。2.胎鼠情况不同缺氧天数的胎鼠体重明显低于空气对照组(p＜0.0 1),随缺氧天数增加而进一步降低,右心室/左心室+室间隔(RV/LV+S)均明显高于空气对照组(p＜0.01),不随缺氧天数增加而进一步增加。3.胎肺情况胎肺重量在宫内缺氧2天组即明显降低(p＜0.01),随宫内缺氧天数的增加进一步降低。肺重/体重的比值在缺氧2天组明显降低(p＜0.01),随宫内缺氧天数的增加有增加。4.胎盘组织HE染色空气对照组胎盘绒毛结构正常,各缺氧组与对照组无差异,脐动脉各缺氧组与对照组间无差异。5.胎肺组织HE染色空气对照组肺泡结构规则,排列有序,肺泡间隔分布均匀,肺泡腔未见明显渗出。随着缺氧天数增加,肺泡结构不规则,排列紊乱,肺泡间隔分布不均匀,肺泡腔见明显渗出。空气对照组肺小动脉管壁较薄、管腔较大,缺氧10天组肺小动脉管壁增厚、管腔狭窄(p＜0.01)。6.辐射状肺泡计数(RAC)缺氧2天组即明显降低,随宫内缺氧天数的增加进一步降低。7.肺血管形态测定随着宫内缺氧时间的延长肺血管形态变化,缺氧10天组,其管壁面积/总面积(WA%)、管壁厚度(um)、管壁厚度/肺小动脉外径(WT%)的p＜0.01。结论1.成功建立大鼠宫内缺氧模型。2.宫内缺氧,胎鼠发育受限、胎肺发育不良;并随着宫内缺氧时间的延长,胎鼠发育受限进一步加重。第二章MK-801对不同宫内缺氧所致胎鼠肺发育受阻的作用目的检测对照组及各缺氧组胎肺组织NMDAR表达情况,并观察NMDA受体拮抗剂(MK-801)对宫内缺氧下胎鼠发育的作用。方法1.动物模型的制备及实验分组动物模型同第一章。实验分组为:空气对照组,空气+MK-801组,缺氧对照组,缺氧+MK-801组。2.胎肺组织NMDARmRNA表达对空气对照组及各缺氧对照组部分肺组织进行RNA的提取,进行NMDA1及2A、B、C、D受体mRNA的RealTime-PCR测定(由上海闪晶公司完成)。3.一般情况相关检查同第一章。4.胎盘组织病理学检查同第一章。5.肺组织相关检查同第一章。6.统计学分析试验数据以均数±标准差表示,多组间比较采用单因素方差分析(one-way ANOVA)及SNK-q检验。p＜0.05认为有统计学意义。结果1.胎肺组织NMDAR表达空气对照组,胎鼠肺组织以NMDAR2D表达为主;随着宫内缺氧时间的延长,胎肺组织各NMDAR表达均增高,于缺氧6天表达最高(p＜0.01),其中NMDAR2D表达最显著;在缺氧10天,肺组织各NMDAR表达与空气对照组比较无差异。2.胎鼠存活率MK-801可明显地提高各缺氧组的存活率(p＜0.01)。3.胎鼠情况加入MK-801,减轻了缺氧所致胎鼠体重下降。各空气+MK-801组与空气对照组比较,胎鼠体重要轻于后者(p＜0.01)。加入MK-801,减轻了缺氧所致RV/LV+S(%)下降。各空气+MK-801组与空气对照组比较,RV/LV+S(%)要大于后者(p＜0.01)。4.胎肺组织HE染色各缺氧+MK-801组较缺氧组肺泡数量增加,肺泡结构规则,排列有序,肺泡腔红细胞渗出减少。各空气+MK-801组较空气组肺泡数量减少,肺泡结构不规则,排列紊乱,肺泡间隔无明显变化,可见肺泡腔明显红细胞渗出。缺氧+MK-801组与缺氧对照组比,肺小动脉改变不明显,空气+MK-801组与空气对照组比,肺小动脉改变不明显。5.辐射状肺泡计数(RAC)加入MK-801,减轻了缺氧所致RAC下降。各空气+MK-801组与空气对照组比较,RAC值小于后者(p＜0.01)。6.肺血管形态测定缺氧+MK-801组较缺氧组,肺血管形态有改善。缺氧10天+MK-801组与缺氧10天组比,管壁面积/血管总面积(WA%)、管壁厚度(um)、管壁厚度/肺小动脉外径(WT%)的p＜0.05。空气+MK-801组与空气对照组比肺血管形态无差异。结论1.首次观察NMDAR在正常及缺氧胎鼠肺发育中的表达情况2.首次发现MK-801对宫内缺氧下胎鼠发育有保护作用,重点观察到MK-801对宫内缺氧下胎鼠肺组织发育的保护作用3.单独使用MK-801对胎鼠发育有毒性作用