【摘 要】
：
嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）属于革兰氏阴性短杆菌,是一种重要的条件致病菌,其引起的鱼类出血性败血症（MAS）给水产养殖业带来了严重的经济损失。嗜水气单胞菌还可引起人类腹泻、脓毒症和坏死性筋膜炎。因此,对嗜水气单胞菌致病机制的研究显得尤为重要。双组分系统（Two-Component System,TCS）是细菌感受、反应和适应环境改变或自身胞内状态的一种信号转导机制,En
论文部分内容阅读
嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）属于革兰氏阴性短杆菌,是一种重要的条件致病菌,其引起的鱼类出血性败血症（MAS）给水产养殖业带来了严重的经济损失。嗜水气单胞菌还可引起人类腹泻、脓毒症和坏死性筋膜炎。因此,对嗜水气单胞菌致病机制的研究显得尤为重要。双组分系统（Two-Component System,TCS）是细菌感受、反应和适应环境改变或自身胞内状态的一种信号转导机制,EnvZ/OmpR系统是经典的双组分系统之一。本实验室通过同源重组的方法构建了双基因缺失株ΔenvZ/ompR,并对ΔenvZ/ompR生物学特性和致病力进行了评估。主要结果如下:1.envZ/ompR基因缺失株的构建通过同源比对和蛋白功能预测发现,嗜水气单胞菌ZYAH72的BFW97＿22565/BFW97＿22560基因是EnvZ/OmpR双组分系统的同源基因,我们将该对基因命名为envZ/ompR。为了探讨嗜水气单胞菌EnvZ/OmpR的功能,本研究以自杀性质粒pRE112为载体,通过同源重组的方式,氯霉素正向筛选结合蔗糖负向筛选策略获得envZ/ompR基因缺失株。2.ΔenvZ/ompR的生物学特性研究通过检测生物被膜形成发现ΔenvZ/ompR形成生物被膜的能力相对于野生株ZYAH72下降了19.9%,表明双组分系统EnvZ/OmpR促进细菌生物被膜的形成。泳动实验表明相对于野生株,缺失株的泳能力没有变化,且透射电镜下观察发现ΔenvZ/ompR的鞭毛完好,说明EnvZ/OmpR不参与调控嗜水气单胞菌鞭毛的合成和装配。通过检测细菌感染CIK细胞后上清中LDH的释放量来评估ΔenvZ/ompR的细胞毒性,结果表明缺失株的细胞毒性和野生株无显著性差异。渗透胁迫生长实验结果显示嗜水气单胞菌在不同盐浓度培养基中的生长没有表现出对于双组分系统EnvZ/OmpR的依赖性,然而qRT-PCR结果表明,低渗条件下,双组分系统EnvZ/OmpR上调外膜孔蛋白基因omp F转录,而高渗条件下双组分系统EnvZ/OmpR上调外膜孔蛋白基因omp C转录,表明嗜水气单胞菌中EnvZ/OmpR参与渗透胁迫响应,具体作用机制还有待进一步研究。3.ΔenvZ/ompR致病性研究在草鱼鱼血杀伤实验中,和草鱼血共同孵育1小时后,野生型ZYAH72细菌数量较初始细菌数量上涨了3.82倍,ΔenvZ/ompR的细菌数量仅为原始细菌的90.1%,表明ΔenvZ/ompR相对于野生株抗血液杀伤能力显著减弱。通过斑马鱼注射和刮伤感染两种感染模型评估了ΔenvZ/ompR的LD50,结果表明在注射感染条件下缺失株相对野生株毒力变化不显著,在刮伤感染条件下缺失株相对野生株毒力下调了4.80倍,提示EnvZ/OmpR促进嗜水气单胞菌由皮肤创口向全身系统扩散过程发挥作用。草鱼组织载菌量检测结果发现ΔenvZ/ompR感染草鱼后各脏器的载菌量相比于野生株显著降低,表明EnvZ/OmpR促进细菌的全身侵袭能力。qRT-PCR结果表明ΔenvZ/ompR感染引起的宿主促炎细胞因子TNF-α和IL-6表达量减少,再结合ΔenvZ/ompR感染草鱼后临床症状较轻,说明EnvZ/OmpR参与嗜水气单胞菌的致病过程。综上,本研究初步探究了嗜水气单胞菌双组分系统EnvZ/OmpR的功能,发现其参与响应渗透胁迫,参与调控生物被膜形成,且在致病过程尤其是宿主体内系统扩散过程发挥重要作用,本研究为嗜水气单胞菌致病调控机制的研究提供了科学依据。
其他文献
2018年以来,随着国家光伏行业“531”新政的颁布,光伏电站存量市场的并购交易急剧增多,也由此引出商誉这一并购环节的附加产物。选择写商誉会计处理的有关论文,也是因业务处理过程中遇到很多有关于会计确认和会计计量的问题。商誉是企业最难以辨认和难以进行会计处理的资产,而且商誉本身的确认和计量还受到可辨认净资产的影响,几乎涉及到企业的全部会计要素。因此,我希望借助案例分析,对有关会计处理提供一些参考。本
在猪的疾病治疗机制中,猪肺泡巨噬细胞3D4/21作为一种先天性免疫细胞,通过分泌细胞因子发挥着非常重要的作用。近年来的研究表明,增强子作为一种顺式调控元件,通过显著提高基因的表达水平,调控细胞类型特异性基因的时空选择性表达,在免疫机制方面的功能逐渐被发现并研究。其中,鉴定增强子是本领域研究的热点与难点。在全基因组水平上研究猪的增强子与其相关生物学的过程,鲜有报道。本研究利用Poly（I:C）刺激猪
禽类的性别决定以及性腺分化过程受到多种因子共同调控,研究较为深入的有具有剂量效应的睾丸决定因子DMRT1、卵巢发育相关的FOXL2等基因,但目前没有确切的启动禽类性别分化的因子。miRNA组织表达特异性有助于研究胚胎器官发育过程,目前发现多个miRNA在禽类性腺中呈现性别偏向表达,具有潜在调控禽类性腺分化的功能。课题组前期筛选了在鸡胚性腺等组织具有雄性偏好表达的miR-2954,并在支持细胞中验证
非洲鸵鸟是世界上现存最大的鸟,它的免疫能力强,饲喂成本低,生长发育快,适应范围广,经济收益高。非洲鸵鸟在饲喂过程中,前3个月为育雏期,由于受到感染、疾病和应激等影响,育雏期鸵鸟的死亡率较高,最高有记录为50%。因此,降低育雏期鸵鸟的死亡率是鸵鸟养殖中迫切需要解决的问题。研究表明,育雏期鸵鸟的高死亡率与免疫功能发育不完善密切相关。法氏囊是鸟类特有的免疫器官,为B淋巴细胞发育的场所,其稳态的维持对免疫
肌内脂肪是猪的重要经济性状,脂肪酸组成是影响猪肉口味的重要因素。脂滴对于肌内脂肪以及脂肪酸的调节至关重要。脂滴是脂质和能量稳态中心的储存细胞器,脂滴具有独特的结构,脂滴是由甘油三酯、单层的磷脂以及磷脂表面的许多参与细胞生物学过程的蛋白质所组成。丝状的肌动蛋白、管状的微管以及结构功能较为稳定的中间丝共同组成丰富多彩的细胞骨架网络。细胞骨架是一种丝状支架,从细胞质膜到细胞核都存在其分布,细胞骨架三种组
骨骼肌是机体最大的组织,猪骨骼肌的发育与生长速度、饲料效率、胴体性状以及肉质性状密切相关。染色质相关RNA（Chromatin-Associated RNA,caRNA）是一类与染色质在空间上存在相互作用的RNA,通过与染色质相互作用而调控基因的表达。近年的研究显示caRNA对骨骼肌的发育具有潜在的调控作用,但其机制尚不明确,且猪中有关caRNA的鉴定及其对骨骼肌发育调控的研究鲜有报道。本研究以2
在促性腺激素（Gonadotropin,GTH）依赖期卵泡发育过程中,FSH诱导颗粒细胞（Granulosa cell,GC）增殖和分化、卵泡腔扩展,从而赋予卵泡分泌雌激素与排卵的能力。GTH依赖期卵泡发育不仅是雌性动物发情周期更替的内在驱动力,也是维持第二性征和雌性行为的生理基础,但是关于GTH依赖期卵泡所经历的发育事件和调控信号还未有详细报道。本研究以初情期前的小鼠为模型利用PMSG诱导GTH
普通牛和瘤牛是世界上两个主要的牛亚种,两者在环境适应性和经济性状等方面存在明显差异,是我国中南部地区肉牛品种的主要血统来源;深入解析两者的遗传资源差异,对理解肉牛优异性状的形成机制及促进我国品种改良进程具有重要意义。本研究利用二代高通量测序数据成功构建了 1 1个品种83头牛的基因组拷贝数变异（CNV,Copy Number Variation）数据库,利用数量遗传学、比较基因组学等多种生物信息学
分娩是指哺乳动物在妊娠末期将胎儿排出体外的过程,其受多种事件影响,包括宫颈成熟、子宫收缩、胎膜破裂和胎盘分离等。而这些事件背后激素和免疫炎症是主要影响因素,但其作用机制尚未明确。本研究根据课题组前期对不同妊娠阶段的大白猪和清平猪胎盘进行转录组测序的结果,获得差异表达的膜联蛋白A1（Annexin A1,ANXA1）。ANXA1有缓解炎症的作用,但在分娩启动中的功能尚不清楚。本论文旨在探索ANXA1
鳜（Siniperca chuatsi）和黄颡鱼（Pelteobagrus fulvidraco）是两种重要的淡水养殖鱼类,具有优异的肉质和极高的经济价值,在我国具有比较大的养殖规模。近年来,随着集约化养殖的迅速发展,传染性脾肾坏死病毒（ISKNV）和鲶爱德华氏菌导致的传染病不断爆发,给我国的鳜和黄颡鱼养殖业造成了严重的经济损失。为了有效地控制这两种传染病的暴发和传播,快速、灵敏地检测ISKNV和