【摘 要】
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目的:宫颈癌（cervical cancer,CC）是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁着女性的健康。目前,关于宫颈癌的发病机制研究尚不完全清楚。普遍认为是由人乳头瘤病毒（hmuan papilloma virus,HPV）的持续感染所致。HPV感染后的炎症反应是加速宫颈癌发展的驱动力,浸润的免疫细胞及其分泌的细胞因子、趋化因子和生长因子对宫颈癌周围的炎症微环境起着重要作用。IL-32作为
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目的:宫颈癌（cervical cancer,CC）是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁着女性的健康。目前,关于宫颈癌的发病机制研究尚不完全清楚。普遍认为是由人乳头瘤病毒（hmuan papilloma virus,HPV）的持续感染所致。HPV感染后的炎症反应是加速宫颈癌发展的驱动力,浸润的免疫细胞及其分泌的细胞因子、趋化因子和生长因子对宫颈癌周围的炎症微环境起着重要作用。IL-32作为一种促炎因子,可以参与调控肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭以及凋亡等生物学过程。关于IL-32在调控宫颈癌细胞功能方面的研究鲜有报道。因此,在本研究中,选择IL-32对宫颈癌细胞的功能和侵袭相关分子机制进行探索,旨在揭示IL-32在宫颈癌发展过程中的潜在作用机制。方法:宫颈癌和癌旁组织中qRT-PCR检测IL-32的表达。使用IL-32α与IL-32γ、IL-32 siRNA分别作用Hela、Siha和HcerEpic细胞,CCK8、划痕和Transwell小室实验分别检测其对细胞增殖、迁移和侵袭的影响。基因芯片技术探索IL-32和miRNAs的相关性。miR-205 mimic、miR-205 inhibitor转染Hela、Siha和HcerEpic细胞,观察和IL-32的相互作用。qRT-PCR和Western Blot用于Hela、Siha细胞被处理后,检测IL-32、miR-205、NF-κB p50、NF-κB p65、MMP2和MMP9在mRNA和蛋白水平的表达情况。结果:IL-32在宫颈癌组织和细胞中表达显著升高（p<0.05）。使用IL-32 siRNA敲低hela和Siha中IL-32的表达,CCK-8法检测发现:Hela细胞增殖活力显著受到抑制,而Siha细胞的活力明显被提高（p<0.05）;通过划痕试验和Transwell检测发现:Hela和Siha细胞的迁移与侵袭能力都明显受到了抑制（p<0.05）。当使用外源性细胞因子r IL-32α和r IL-32γ分别作用于Hela、Siha和HcerEpic细胞后,CCK-8法检测显示,100ng/mL IL-32α和γ处理Hela时,48h增殖活力最显著（p<0.01）,但100ng/mL IL-32α和γ处理Siha细胞时,36h抑制作用最明显（p<0.01）,而只有IL-32γ在50ng/mL对HcerEpic细胞作用48h时有促进增殖作用（p<0.05）。细胞划痕迁移显示,Hela、Siha在浓度为100ng/mL IL-32α和γ作用48h时明显促进了细胞的迁移能力（p<0.01）,而对HcerEpic没有明显的作用（p>0.05）。Transwell小室观察细胞侵袭结果显示:Hela、Siha在浓度为100ng/mL IL-32α和γ处理24h时促进了细胞的侵袭（p<0.01）,而对HcerEpic没有作用（p>0.05）。基因芯片结果提示miR-205的表达与IL-32的表达相关,在HcerEpic细胞里,过表达IL-32,miR-205的表达明显上升,抑制miR-205,IL-32的表达也上升,而解除miR-205的抑制,IL-32的表达显著下降了（p<0.05）。在宫颈癌细胞中,敲降IL-32,miR-205明显抑制;过表达IL-32,miR-205的表达上升;而抑制miR-205的表达,IL-32也受到抑制;过表达miR-205,IL-32也得到了恢复（p<0.05）。加入NF-κB抑制剂后,IL-32的表达没有明显变化,而miR-205受到了显著抑制（p<0.01）。过表达或敲降miR-205后,NF-κB、MMP2和MMP9蛋白水平表达没有显著变化（p>0.05）。结论:1.IL-32在宫颈癌组织和细胞中显著表达。2.IL-32能够促进宫颈癌细胞的迁移和侵袭。3.IL-32激活NF-κB信号通路进一步调节miR-205的变化促进宫颈癌细胞的侵袭。
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