海洋乳酸菌抗氧化活性研究

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 7次 | 上传用户:liongliong484
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新陈代谢是细胞能量传递中不可缺少的阶段。在新陈代谢中会产生诸如超氧阴离子(O2-),过氧化氢(H2O2)以及羟自由基(·OH)等活性氧和自由基。当体内活性氧累积过多时,会造成蛋白质、脂质以及核酸的氧化损伤,引发癌症、阿茨海默氏症、以及帕金森综合征等。研究证实,某些乳酸菌菌株具有抗氧化活性,可作为一种新的抗氧化剂。海洋动物肠道富含乳酸菌,但对海洋源乳酸菌系统研究较少。本研究拟从海洋生物消化道中分离乳酸菌,并筛选具高抗氧化活性的菌株,进一步评价抗氧化特性作用。首先,通过厌氧涂布平板法、过氧化氢酶试验、革兰氏染色从海洋动物肠道中初步筛选出29株疑似乳酸菌。其中Y3、Y4、Y16、Y41、Y42、Y44等6株菌DPPH自由基清除率显著,分别为42.97±2.68%、37.65±4.79%、43.18±6.03%、29.57±2.04%、32.73±1.43%、33.45±7.43%。通过16s r RNA测序并进行NCBI数据库BLAST比对,鉴定菌株Y3、Y4、Y16为干酪乳杆菌(Lactobacillus casei),Y41为植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarum subsp.Plantarum),Y42、Y44为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。其次,对6株乳酸菌的完整细胞和无细胞提取物抗氧化性进行综合评价。6株菌均耐受0.5 mmol/L H2O2,其中菌株Y3和Y44可耐受1.0 mmol/L H2O2。菌株Y44羟自由基(·OH)清除能力最高,其完整细胞和无细胞提取物对羟自由基清除率分别为67.09±7.83%、71.40±1.99%。菌株Y3、Y4、Y16、Y44完整细胞和无细胞提取物以及Y42无细胞提取物对超氧阴离子(O2-)清除率均超过50%。6株乳酸菌均具有还原能力,但还原能力都低于对照菌LGG。6株菌无细胞提取物对DPPH自由基清除率均小于完整细胞。菌株Y4、Y42、Y44具有较高的超氧化物歧化酶(SOD)活性,分别为19.62±0.65U/mg prot、17.14±1.29 U/mg prot,16.37±1.84 U/mg prot。6株菌中Y3谷胱甘肽过氧化物酶的(GSH-Px)活性最高,为35.92±8.04 U/mg prot。研究表明,Y3和Y44在6株乳酸菌中具有较好的抗氧化特性。最后,研究了乳酸菌Y3、Y44对H2O2氧化损伤HT-29细胞的保护作用。结果表明,HT-29细胞的存活率由50.06±1.68%显著提高到68.76%、85.89%(P<0.05),HT-29细胞内SOD活性由2.41±0.07 U/mg prot显著提高到4.46±0.18 U/mg prot、7.24±0.30 U/mg prot(P<0.05),GSH-Px活性由11.37±0.35 U/mg prot显著提高到13.05±0.79、17.92±1.56U/mg prot(P<0.05),MDA含量由3.43±0.43 nmol/mg prot显著降低至1.49±0.36 nmol/mg prot、1.18±0.19 nmol/mg prot(P<0.05)。同时Y3、Y44显著降低E.coli刺激HT-29细胞产IL-8的水平,由63.33 pg/m L降至38.41±4.72 pg/m L、36.53±5.51 pg/m L(P<0.05)。研究表明,菌株Y3和Y44具有潜在的益生特性。
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