论文部分内容阅读
目的:本研究使用自发性高血压大鼠（spontaneously hypertension rats,SHR）作为原发性高血压的模式动物,进行为期6-22周的观察,选用氯沙坦钾作为阳性对照药,采集清血丸用药前后SHR大鼠血压、心率,红细胞膜脂质含量、红细胞脆性,以及氧化应激及血红素相关指标等指标,评估藏药清血丸对SHR大鼠的血压干预作用和初步的作用机制。方法:选用5周龄的SPF级雄性SHR大鼠和WKY（Wistar-Kyoto rats）大鼠为实验对象。SHR大鼠50只,按体重分层,每组10只。分为SHR组、SHR组+低剂量清血丸（0.0423 g/kg/d）、SHR组+中剂量清血丸（0.0846 g/kg/d）、SHR组+高剂量清血丸（0.1692 g/kg/d）、SHR组+阳性对照药氯沙坦钾（20mg/kg/d）,WKY组为正常血压对照组。实验期间观察各组大鼠一般情况,并于每周测定各组大鼠体重、心率和血压;给药第6周末,大鼠眼眶取血,酶标仪检测血清中SOD、MDA、Heme、HO-1、直接胆红素的浓度;液质联用技术测定红细胞膜脂质磷脂酰胆碱（PC）、鞘氨醇（SP）、磷脂酰乙醇胺（PE）、胆固醇（CH）和磷脂酰丝氨酸（PS）的含量;给药第22周末,大鼠腹主动脉采血,NaCl渗透溶液法检测红细胞脆性。结果:1.一般状况观察各组大鼠饮食排便正常,自主活动正常,体重均逐渐增长。WKY品系大鼠慵懒嗜睡,而SHR品系大鼠整体活泼好动。SHR组大鼠毛发随周龄增加渐渐发黄;清血丸处理组大鼠毛发泛白顺滑,肌肉紧实,体重增加最为显著;氯沙坦组大鼠大便略溏稀。2.清血丸对SHR大鼠血压的影响2.1清血丸对SHR大鼠收缩压的影响WKY大鼠收缩压作为正常水平对照,随着周龄增长收缩压维持在130 mmHg。与其相比SHR大鼠收缩压明显高于正常水平（P<0.05）,且随着周龄增加,收缩压逐渐升高,于9周龄后维持在200 mmHg左右。与SHR组相比,阳性对照药氯沙坦在给药第2周之后控制了血压的自发升高,将收缩压持续控制在160mmHg左右（P<0.05）;清血丸高剂量在给药3周后对SHR大鼠收缩压表现出明显的控制作用（P<0.05）。2.2清血丸对SHR大鼠舒张压的影响WKY大鼠舒张压作为正常水平对照,随着周龄增长在90 mmHg波动。SHR大鼠舒张压明显高于WKY组（P<0.05）,第2周升高明显,但随周龄增长的升高趋势变缓,在9周龄之后基本稳定在145 mmHg左右。与SHR组相比,氯沙坦组大鼠舒张压降低20 mmHg,具有显著性差异（P<0.05）;清血丸高剂量对舒张压没有影响,低、中剂量给药5周后轻微升高SHR大鼠舒张压,但无显著的统计学意义。2.3清血丸对SHR大鼠平均动脉压的影响WKY大鼠平均动脉压作为正常水平对照,平均动脉压在100 mmHg左右。SHR大鼠平均动脉压在160mmHg左右,明显高于WKY组（P<0.05）。与SHR组相比,氯沙坦组大鼠平均动脉压为130 mmHg,显著低于SHR大鼠（P<0.05）;清血丸各组平均动脉压与SHR组无统计学差异。2.4清血丸对SHR大鼠脉压差的影响WKY大鼠脉压差随着周龄增长在45 mmHg左右波动。SHR大鼠脉压差第2周升高明显,之后稳定在63 mmHg左右,明显高于WKY组（P<0.05）。与SHR组相比,清血丸各给药组和氯沙坦组的脉压差均明显减小,具有显著性差异（P<0.05）。3.清血丸对SHR大鼠心率的影响WKY组大鼠心率在275-400次/min之间,波动范围小,较为平稳,不受周龄影响。SHR大鼠心率在350-500次/min之间,波动范围大,不受周龄影响。但SHR大鼠心率显著高于WKY大鼠（P<0.05）。氯沙坦组在给药第2、3周心率明显高于SHR大鼠（P<0.05）。清血丸各组对心率均有升高作用（P<0.05）。4.五种磷脂化合物液质含量测定方法学考察磷脂酰胆碱（PC）、鞘氨醇（SP）、磷脂酰乙醇胺（PE）、胆固醇（CH）和磷酯酰丝氨酸（PS）的母子离子对依次为:758.5/183.9、300.3/282.8、746.4/605.4、369.1/105.1、788.5/283.3;保留时间依次为1.94、1.59、2.19、0.65和3.19 min。五种磷脂化合物在一定浓度范围内都呈现良好线性（线性相关系数r均大于0.99）。精密度RSD%值均小于7,说明仪器的稳定性和重复性较好。重复性的6个平行样品中五种磷脂化合物浓度的RSD%值差异较大。重复性最好的是PC,RSD为4.8%,CH和PS的重复性最差,RSD值高达30%以上,说明这五种不同的磷脂化合物在本实验条件下,提取重复性的差异较大。五种磷脂化合物含量稳定性检测的RSD%值均小于9%,说明试液在24h之内有较好的稳定性。5.清血丸对SHR大鼠五种红细胞膜磷脂含量的影响大鼠红细胞膜中五种磷脂化合物含量由高到低的顺序依次为PE、PC、PS、CH、SP。与SHR组相比,清血丸对SHR大鼠红细胞膜中的磷脂酰胆碱含量无明显影响,鞘氨醇和磷脂酰乙醇胺小幅下降（P<0.05）,胆固醇和磷酯酰丝氨酸小幅升高（P<0.05）。氯沙坦对SHR大鼠红细胞膜中的磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、胆固醇含量无明显影响,鞘氨醇小幅下降（P<0.05）,磷酯酰丝氨酸小幅升高（P<0.05）。6.清血丸对SHR大鼠红细胞脆性的影响SHR大鼠,在0.36%浓度NaCl溶液中开始破裂,吸收值增加4.3倍,随着NaCl溶液浓度降低至0.27%,红细胞基本裂解完全,吸收值增加了 54%。清血丸低剂量对SHR大鼠红细胞脆性影响不显著,中剂量和高剂量组SHR大鼠红细胞在0.36%和0.27%NaCl浓度渗透液的吸收值下降,并且高剂量具有统计学意义（P<0.05）。氯沙坦对SHR大鼠的红细胞在0.36%和0.27%NaCl浓度渗透液吸收值下降,但没有统计学差异。7.清血丸对SHR大鼠抗氧化应激的影响与SHR组相比,清血丸能够降低SHR大鼠血浆中MDA含量（P<0.05）,升高SHR大鼠血浆中SOD水平（P<0.05）,提高了SHR大鼠抗氧化应激能力。8.清血丸对SHR大鼠血红素相关指标的影响与SHR组相比,各给药组大鼠Heme水平升高,具有显著性差异（P<0.05）。清血丸对SHR大鼠HO-1没有明显影响,但可升高大鼠直接胆红素（P<0.05）结论:1.清血丸对自发性高血压大鼠收缩压升高表现出一定抵抗作用,可减小脉压差,表现出对血管系统的保护作用。2.清血丸可提高自发性高血压大鼠红细胞膜的流动性,该作用可能与改善红细胞膜脂质类成分含量相关。3.清血丸可提高自发性高血压大鼠的抗氧化能力。