【摘 要】
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目的:研究PCNA与14-3-3γ对血管平滑肌细胞的增殖和凋亡的影响。方法:（1）构建PCNA与14-3-3γ过表达质粒与PCNA与14-3-3γ小干扰RNA（Small interfering RNA,si RNA）,将过表达质粒与si RNA转染至大鼠主动脉血管平滑肌细胞（A7r5细胞）中,通过荧光显微镜观察绿色荧光标记GFP蛋白及Western blotting检测目的蛋白验证转染效率。（2
【基金项目】
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万力教授国家自然科学基金课题“14-3-3γ-PCNA交互作用在VSMC增殖与凋亡中的功能与机制研究”（№:81860082）；
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目的:研究PCNA与14-3-3γ对血管平滑肌细胞的增殖和凋亡的影响。方法:（1）构建PCNA与14-3-3γ过表达质粒与PCNA与14-3-3γ小干扰RNA（Small interfering RNA,si RNA）,将过表达质粒与si RNA转染至大鼠主动脉血管平滑肌细胞（A7r5细胞）中,通过荧光显微镜观察绿色荧光标记GFP蛋白及Western blotting检测目的蛋白验证转染效率。（2）分别过表达及敲低PCNA后,使用Western blotting检测细胞周期蛋白cyclin D1、凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达;EDU检测增殖细胞比例;CCK-8及流式细胞术检测细胞活力及细胞凋亡。（3）过表达及敲低14-3-3γ后,Western blotting检测细胞周期蛋白cyclin D1、凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达;EDU检测增殖期细胞比例;CCK-8及流式细胞术检测细胞活力及细胞凋亡。（4）敲低PCNA或14-3-3γ后,通过流式细胞术检测细胞周期。结果:（1）过表达质粒转染后,24 h及48 h转染效率相当,无明显差异;使用浓度梯度进行si RNA转染,在5 ng/μl浓度下转染效率高,细胞状态良好。（2）与对照组相比,过表达PCNA后,cyclin D1的表达明显升高,Bax和Bcl-2的表达无明显变化;EDU结果显示,过表达组增殖期细胞增加,而敲低组增殖期细胞减少。CCK-8和流式细胞术实验结果表明,过表达PCNA可促进血管平滑肌细胞增殖,而敲低组则抑制血管平滑肌细胞的增殖。（3）另一方面,敲低和过表达14-3-3γ后,Bax及Bcl-2的表达均无明显变化,过表达组cyclin D1蛋白表达升高;EDU结果显示,过表达组增殖期细胞增加,而敲低组增殖期细胞无明显变化;CCK-8和流式细胞术实验结果表明,过表达14-3-3γ可抑制血管平滑肌细胞凋亡,而敲低组则促进血管平滑肌细胞的凋亡。（4）敲低PCNA或14-3-3γ后,与对照组相比,细胞S期的百分比下降,而G0/G1期的百分比上升,说明细胞周期处于停滞状态。结论:PCNA可促进血管平滑肌细胞的增殖,14-3-3γ蛋白对血管平滑肌细胞凋亡有抑制作用,PCNA或14-3-3γ对增殖和凋亡的调控可能与调节细胞周期进程相关,这些结果可作为下一步研究的研究基础。
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目的:目前经导管主动脉瓣置换（transcatheter aortic valve implantation,TAVI）术后常规予以双联抗血小板治疗,但较多研究证实单药抗血小板治疗（single antiplatelet therapy,SAPT）疗效并不差于双联抗血小板治疗（dual antiplatelet therapy,DAPT）;本研究的目的是比较TAVI术后DAPT与SAPT的有效性及
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